pitx2基因多态性与先天性心脏病相关研究

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1、分类号：R725密级：学位类别：科学学位囹专业学位口学校代码：学号：学科门类：l06220072565医学又坪酱科^普TlANJI麓M蠢OlCALUHlV瑟謦lSlTY硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：PITX2基因多态性与先天性心脏病相关研究TITLEPITX2GenePloymorphismAssociatedwithCongenitalHeartDiesease一级学科：临床医学二级学科：儿科学论文作者：刘洋指导教师：张宏艳天津医科大学研究生院二O一一年五月学位论文原

2、创性声明IIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2001045本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：击牟日期．／f钌彤／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密厂]，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密凹。(请在相对应的方框内打“√’’)学位论文作者签名：壶丝玺日期：／1年厂月y日导师签名：毖v-v绺I／期：，／年!阴耖同天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：本课题的研究重点是应用生物信息学的研究方法与研究工具，对与CHD相关的PITX2基因c亚型的编码区SNPs进行分析、筛选，确定可能影响基因功能的SNPs位点。进而在CHD与健

4、康对照人群中用实验的方法对所得SNPs位点予以验证，探讨其与中国人群CHD的相关性，为预防和减少CHD的发生及制定CHD防治对策提供科学理论依据。方法：1．利用NCBI网站SNPs数据库查找PITX2基因c亚型编码区所有SNPs，同时运用在线生物信息学工具SNPper软件查找PITX2基因c亚型编码区的非同义SNPs。比较两种查询结果，参考相关文献，最终确定所要研究的SNPs位点。2．进行临床数据资料和临床标本收集和整理。采用病例．对照研究方法，采集入组CHD患者和健康对照组患者外周血2ml，以枸橼酸

5、钠抗凝，于．80℃保存备用。3．基因测序并评价SNPs位点和CHD的相关性。血液基因组DNA提取一引物准备一PCR扩增目的片段--"PCR产物的鉴定一PCR产物测序一数据分析。运用SPSSl7．0软件进行相关数据分析：Hardy-Weinberg遗传平衡检测样本是否符合孟德尔遗传规律；病例．对照组间SNPs位点等位基因频率及基因型频率的比较，各基因型与CHD发病危险性的关系。结果：1．确定的PITX2基因2个SNPs位点分别为rsl051887：316G>C(Glul06Gln)，rs28936409

6、：272G>C(Ar991Pro)。2．本研究所涉及的2个SNPs，体1051887及rs28936409，在病例及对照组中均未见多态性结果。3．综合dbSNP数据库和SNPper软件的检索结果，确定本实验首次发现了PITX2基因的304C>G(Glul02Gln)位点存在C／G基因型，该SNP位于PITX2基因同源结构域内的外显子5内，mRNA序列第942位C—G，导致第102个氨基酸由谷氨酸(Glu，E)一谷氨酰胺(Gin，Q)，属非同义cSNP。4．数据分析结果显示，全部3个SNPs位点的病例组

7、及对照组的基因型分布经Hardy．Weinberg遗传平衡检测无差异(pO．05)，即样本符合孟德尔遗传规律。5．本研究新发现的PITX2基因SNP位点304C>G(Glul02Gln)，病例．对照研究天津医科大学硕士学位论文发现，CHD组的CG基因型频率高于对照组(Z2=7．177，PG(Glul02Gln)，病例

8、．对照研究发现，间隔缺损类CHD组CG基因型频率高于对照组(f=6．400，P<0．05)，且等位基因的频率亦高于对照组(x2=5．120，P<0．05)，CG基因型OIb2．778，所以CG基因型使间隔缺损类CHD发生的危险度增加。7．PITX2基因新的SNPs位点304C>G(Glul02Gln)，病例．对照研究发现，心血管畸形类CHD组的CG基因型频率高于对照组(f=11．868，P