色谱柱的故障诊断与维护

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1、色谱柱的故障诊断与维护液相色谱柱介绍提纲I.常见问题，现象及排除方案-基线漂移/噪音-峰型-压力变化-保留漂移II.日常维护/良好的实践-在线装置-样品制备-操作的限制III.再生/维修已损坏的色谱柱-物理方法-化学方法I.常见问题基线噪音可能的原因：流动池脏检测器灯有问题如果是周期性的，则起源于泵的脉冲温度对检测器的影响气泡经过检测器Time(min.)基线漂移可能的原因：梯度洗脱温度不稳定(示差检测器）流动相中有污染物柱中的流动相没有平衡体系中有污染物流出鬼峰鬼峰——即使不样也会出现的峰6020%-100%MeOH15没有进样30问题1-流动相脏15问题2-样品过量(

2、也可能是回收率太差)0371517峰型双峰柱塌陷正常峰双峰可能原因：柱中有死体积过滤片部分堵塞只有一个双峰——组分的共洗脱样品与溶剂不匹配峰型峰展宽所有的峰都展宽柱效降低——柱死体积大进样量/质量高捻度流动相样品与流动相不匹配部分峰展宽前次进样后流出的组分大分子量样品——蛋白或聚合物峰型原因：拖尾峰对称性>1.2部分峰拖尾二次保留效应——残留硅醇基的反应小峰紧跟在大峰的后面流出NormalTailing所有峰拖尾额外的柱效应柱损坏柱头有污染金属不适当的样品量/溶剂NormalTailing峰型前伸峰不对称性<0.9NormalFronting可能的原因在大峰前，有小峰流出柱死体积样

3、品溶剂不适当过滤片部分堵塞柱过载峰型原因样品的吸收比流动相的吸收值低当样品组分通过色谱柱时打破了原来的平衡用示差检测器时是正常的负峰正常峰负峰宽峰柱外体积增加*在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管*保证所有的管路接头都使用正确*用小体积检测池*减少进样量柱外体积E.C.V=Vinj.+Vtubing+VcellDoNotVolumeOverloadUseAppropriateVolumeInjectionFlowCellMinimizeLengthandDiameterofTubingHPLC使用的接头无死体积接头不适用的接头HPLC中使用的柱接头Swagelok

4、Waters0.1300.090in.in.ParkerRheodyne0.1700.090in.in.ValcoUptight0.0800.090in.in.TroubleshootingJ.W.DolanandLC/GCMagazineLCFittings,PartII.P.Upchurch.6:788(1988)柱外体积效应的影响柱外体积(1ul进样)2.1x150mmF=0.2mL/min.10µL20µL01234567891011Time,min.压力I.不进样时柱压连续升高-泵密封垫-流动相有颗粒-流动相溶解性-流动相的不稳定性(聚合)-形成柱死体积(与使用条件有关)

5、II.进样时压力升高-样品有颗粒-样品在流动相中不溶-样品组分与固定相不兼容保留值漂移I.所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物）-键合相流失-流动相不稳定(可能性较小)-溶剂输送系统(流速变化)II.所有峰都向高保留值方向漂移-在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少-柱改变(可能性较小)-溶剂输送系统(流速变化)III.离子型化合物的色谱峰的保留值漂移-流动相中挥发性组分损失(离子强度,pH漂移)-柱改变(键合相或污染)保留值漂移I.与流动相有关的问题-使用新鲜的流动相?pH?电导?色谱性能测试II.与色谱柱有关的问题-测试新柱-用标准的测试混合样测试新柱-“清洗”

6、色谱柱后再测-考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响良好的柱使用规范在使用前过滤溶剂完全润湿在运输中变干的色谱柱了解溶剂对样品的溶解性及分离的影响对含有保留性较强的杂质组分的样品要进行预处理清除柱填料的局限性pH温度化学兼容性使用新鲜的水溶液，并考虑使用生物稳定剂（如叠氮化钠）定期用强极性的溶剂清洗色谱柱储存色谱柱时，应冲净缓冲言，并用有机溶剂饱和色谱柱（乙腈）避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或将接头拧的过紧预柱与保护柱进样器保护柱预柱从泵来的流动相StrippingorConcentratingColumn分析柱预柱对流动相而言保护柱对色谱柱而言到检测器带可

7、重复使用接头及完整保护柱的卡套柱无保护柱有保护柱HAuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)带Techtron保护柱的Zorbax卡套柱带整体过滤片的Techtron保护柱2mmID卡套柱有或无保护柱的比较mAU160BDSODSHypersil250-2mm有integratedGuardColumn157.5155152.5150147.5145142.51405101520253035minmA