大鼠听觉剥夺后bcl-2、bax、fas在听皮层的表达变化及脑苷肌肽注射液对其变化的影响

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1、授予单位代码10089学号或申请号13050HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位大鼠听觉剥夺后Bcl-2�Bax�Fas在听皮层的表达变化及脑苷肌肽注射液对其变化的影响学位申请人：贾飮导师：刘砚星教授专业：药理学二级学院：基础医学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试

2、验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名:H导师签章:级学院领导盖章:I年月一百河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：赏象导师签章年月日目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………4英文缩写……………………………………………………

3、……………8研究论文大鼠听觉剥夺后Bcl-2、Bax、Fas在听皮层的表达变化及脑苷肌肽注射液对其变化的影响前言…………………………………………………………………9材料与方法…………………………………………………………10结果…………………………………………………………………17附图…………………………………………………………………22附表…………………………………………………………………33讨论…………………………………………………………………36结论…………………………………………………………………41参考文献…………………………………………………

4、…………41综述一Bcl-2、Bax、Fas与细胞凋亡的关系…………………………45综述二脑苷肌肽注射液的应用进展……………………………………50致谢………………………………………………………………………55个人简历…………………………………………………………………56中文摘要大鼠听觉剥夺后Bcl-2、Bax、Fas在听皮层的表达变化及脑苷肌肽注射液对其变化的影响摘要目的：通过双侧耳蜗损毁术建立听觉剥夺（AuditoryDeprivation,AD）动物模型，研究SD大鼠在听觉剥夺后Bcl-2、Bax、Fas在听皮层的表达，以及脑苷肌肽注射液对Bcl-

5、2、Bax、Fas表达变化的影响，了解听觉剥夺后听觉中枢可塑性变化以及脑苷肌肽注射液的作用，为听力障碍患者的辅助治疗提供动物实验资料。方法：1选择耳廓反射灵敏、无中耳疾患、生后3周龄的雄性清洁级健康SD大鼠，共64只，将其至于适宜的温、湿度环境中饲养。按体重将其随机分为8组（8只/组）：7天对照组，7天手术组，14天对照组，14天手术组，14天治疗组，28天对照组，28天手术组，28天治疗组。手术组大鼠实施双侧耳蜗损毁术，对照组大鼠只做耳后切口，治疗组大鼠实施双侧耳蜗损毁术并每日腹腔注射脑苷肌肽注射液，剂量1ml/kg，连续14或28天。2术后7天对各

6、组大鼠进行听性脑干反应（ABR）测试，然后在相同条件下饲养各组动物至对应的时间点后，每组随机取4只大鼠的双侧大脑听皮层做HE染色和免疫组化检测，其余4只取听皮层做实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测。3用HE染色的方法观察大鼠听皮层部位形态学变化。4采用免疫组织化学方法测定大鼠听皮层部位Bcl-2、Bax、Fas的表达，然后在光镜下对棕色颗粒阳性细胞数目进行统计。5采用RT-PCR技术检测大鼠听皮层部位Bcl-2、Bax、Fas基因mRNA的表达。6采用WesternBlot技术检测大鼠听皮层部位Bcl-2、Bax、Fas蛋白的表达变化。结果：1ABR

7、测试情况：对照组SD大鼠经ABR测试在40SPLdB时出现重1中文摘要复波形，耳蜗损毁手术大鼠术后7天双耳在90SPLdB均不能引出重复波形，证明听觉剥夺动物模型制作成功。2术后一般情况:术后第二天听觉剥夺大鼠即能自主饮水摄食，爬行沿直线，拎尾悬空能保持平衡，但是与对照组相比行动仍显迟缓。听觉剥夺大鼠对外界声音刺激不敏感，耳廓反射消失，而对照组耳廓反应灵敏。3HE染色结果：手术组和治疗组均出现不等量的凋亡细胞，体积缩小，颜色深染，胞浆着色浅淡，核固缩，染色质凝集断裂，核仁消失。治疗组与相应的手术组相比，细胞凋亡现象减轻，胞浆红染程度减轻，细胞核，染色质

8、聚集减少。实验结果表明大鼠在听觉剥夺后听皮层出现凋亡现象，脑苷肌肽注射液可以减轻凋亡的程度。4