副溶血弧菌与溶藻弧菌毒力基因分布与抗生素耐药性分析

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：副溶血弧菌与溶藻弧菌毒力基因分布与抗生素耐药性分析Analysisofthedistributionofvirulence-relatedgenesandantibioticresistanceofVibrioparahaemolyticusandVibrioalginolyticus作者姓名：冼钰茵指导教师姓名吴希阳及学位、职称：博士、教授学科、专业名称：工学食品科学学位类型：学术学位论文提交日期：2015年5月15日论文答辩日期：2015年5月21日答辩委员会主席：夏延

2、斌教授（湖南农业大学）论文评阅人：邓小玲主任技师（广东省疾病预防控制中心）张宁副教授（暨南大学）学位授予单位和日期：暨南大学独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期：AG年j■月4日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全

3、了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名:导师签名:签字日期：年X月2丨日签字日期:学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:通讯地址：邮编摘要两种主要食源性弧菌——副溶血弧菌和溶藻弧菌都是海洋生态环境中广泛分布的正常菌群，同时也是重要的病原弧菌，不仅能使水产养

4、殖动物患病，造成巨大的经济损失，还能导致人类食物中毒和胃肠道感染，危害人体健康。鉴于副溶血弧菌和溶藻弧菌具有高度同源性，而现有研究集中在前者，对于溶藻弧菌的致病机理缺乏了解。本论文在毒力相关基因和抗生素抗性两方面的特性比较副溶血弧菌和溶藻弧菌，通过分析与比较两种弧菌毒力基因分布情况及多药耐受现象之间的异同，为了解这两种弧菌的致病机制、耐药机制、流行病学研究和食品安全风险评估提供指导，主要结果如下：1.针对副溶血弧菌和溶藻弧菌的溶血素基因(trh、tdh、tlh)、毒力调控基因(toxR、toxS)和毒力贡献基因

5、(Collagenase、UreR、FlaA、ompW、AspA、fur)构建了两套多重PCR体系并运用于从环境和水产品（青口、白贝、和贵妃蚌等）分离的248株副溶血弧菌和128株溶藻弧菌的毒力基因分布调查，发现这11种毒力相关基因在两种弧菌中均有不同程度的分布：tlh、Collagenase、FlaA、ompW和fur基因在两种弧菌中分布较广，toxR和toxS基因次之；而且两种弧菌的毒力基因分布情况都有各自的特点：副溶血弧菌的分离株不携带tdh和trh基因，AspA、toxR和toxS基因的携带率均超过90

6、%；溶藻弧菌则相反，tdh和trh基因的携带率高达38.28%，AspA、toxR和toxS基因的携带率远低于副溶血弧菌。本论文所构建的多重PCR体系以水煮法提取的细菌DNA为模板同时检测两种弧菌的多个毒力相关基因，具有低成本、高灵敏度和高通量的特点，可用于基层大规模大范围的毒力相关基因发布调查。2.结合表型分型技术和分子分型技术，通过PCR反应筛选与致病性高度相关的O3、O4型副溶血弧菌后辅以血清凝集实验加以验证，从收集到的248株副溶血弧菌中筛选出8株O3型副溶血弧菌和9株O4型副溶血弧菌，通过限制性内切酶

7、SfiⅠ酶切后进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型，为环境副溶血弧菌致病株的深入研究提供参考。3.本论文采用Kirby-Bauer纸片扩散法研究上述副溶血弧菌和溶藻弧菌分离株对水产养殖业中常用的18种抗生素（氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢呋新钠、头孢唑啉、庆大霉素、链霉素、阿米卡星、万古霉素、多粘菌素B、四环素、复方新诺明、红霉素、环丙沙星、利福平和克林霉素）的耐药状况，发现两种弧菌都对多种抗生素具有不同程度的抗性，多药耐受情况十分严重，以溶藻弧菌为甚。基于环境中溶I藻弧菌的存在比副溶血弧

8、菌更为普遍而且对其研究相对不足的现状，本论文的研究结果不仅能用于指导水产养殖行业抗生素的合理规范应用，还能促进对病原弧菌尤其是溶藻弧菌耐药基因定位和耐药机制的研究。关键词：副溶血弧菌；溶藻弧菌；毒力相关基因；耐药性；分型IIAbstractFoodborneVibrioparahaemolyticusandVibrioalginolyticusarecommonaquaticmicro