pedf基因修饰人脐带间充质干细胞对早期糖尿病大鼠视网膜pedf及vegf表达的影响

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1、分类号：R-77学校代码：10062密级：内部2年学号：2012601135博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PEDF基因修饰人脐带间充质干细胞对早期糖尿病大鼠视网膜PEDF及VEGF表达的影响TITLEEffectsofPEDFgene-modifiedhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsontheexpressionofPEDFandVEGFinretinaofearlydiabeticrats一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者

2、：段红涛指导教师：陈松教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R-77学校代码：10062密级：内部2年学号：2012601135学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PEDF基因修饰人脐带间充质干细胞对早期糖尿病大鼠视网膜PEDF及VEGF表达的影响TITLEEffectsofPEDFgene-modifiedhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsontheexpressionofPEDFand

3、VEGFinretinaofearlydiabeticrats一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：段红涛指导教师：陈松教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完

4、全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。√（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：观察色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞（pigmentepithelial-derivedfactorgene-modifiedhu

5、manumbilicalcordmesenchymalstemcells，PEDF-MSCs）对早期糖尿病大鼠视网膜中PEDF、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）表达的影响及对视网膜的保护作用。方法：胰蛋白酶消化法获取人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）并进行体外扩增，采用流式细胞学方法进行鉴定其免疫表型。采用基因重组方法构建慢病毒（lentivirus,LV）-PEDF载

6、体并对其进行基因测序。LV-PEDF以感染复数（multiplicityofinfection,MOI）值为10、30、50体外转染hUCMSCs，采用实时定量聚合酶链反应（realtimequantitativepolymerasechainreaction,realtime-PCR）和酶联免疫吸附测定法（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）分别检测以最佳MOI值转染细胞PEDF及VEGF信使核糖核酸（messengerribonucleicacid,mRNA）和蛋白

7、水平表达。选取链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。实验动物分为五组：正常对照组（N组）、糖尿病对照组（D组）、磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline,PBS）治疗组（B组）、绿色荧光蛋白标记的间充质干细胞（greenfluorescentproteinlabelledmesenchymalstemcells,GFP-MSCs）治疗组（G组）及PEDF-MSCs治疗组（P组）；造模成功后4个月进行干预治疗，P组与G组分别给予PEDF-MSCs、G

8、FP-MSCs，B组给予PBS治疗，N组与D组不予特殊治疗。玻璃体腔注射PEDF-MSCs后2周，荧光显微镜观察PEDF-MSCs在大鼠眼内存活情况。成模后1，4，6个月分别进行苏木素伊红（hematoxylinandeosin,HE）染色观察视网膜结构，测量内丛状层（innerplexiformlayer,IPL）、内核层（innernuclearlayer,INL）及外核层（outernuclearlayer