microrna-126对大鼠胰岛β细胞胰岛素信号通路的调控作用及机制

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：20120035宁夏医科大学硕士研究生学位论文MicroRNA-126对大鼠胰岛β细胞胰岛素信号通路的调控作用及机制MicroRNA-126regulatesinsulinsignalpathwayinratpancreaticisletbetacell学位申请人：王玉琢指导教师：袁文俊申请学位门类级别：理学专业名称：生理学研究方向：心血管生理学所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一五年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUnivers

2、ityThesisforApplicationofMaster’sDegreeMicroRNA-126regulatesinsulinsignalpathwayinratpancreaticisletbetacellStudent’sName:WangYuzhuoSupervisor：YuanWenjunSubjectCategory:ScienceMajor:PhysiologySpecialty:CardiovascularPhysiologySchool:BasicMedicalCollegeC

3、ompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位

4、论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文第一部分大鼠胰岛β细胞分离及纯化摘要目的：优化SD大鼠胰岛β细胞的分离、纯化和培养的方法与条件，为研究microRNA-126(miR

5、-126)在2型糖尿病发病中的作用与机制提供活性与功能良好的胰岛β细胞。方法：SD大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉，经胆总管逆行灌注采用8mL胶原酶Ⅴ（1mg/mL含DNaseI100U）、原位消化后Hitopaque-1077梯度离心分离纯化胰岛细胞并作培养，再将培养后的胰岛细胞用胰蛋白酶消化使其分散成单个的β细胞后对其进行培养。结果：每只大鼠用上述方法可分离、纯化得到胰岛细胞372±45个，胰岛细胞纯度大于90%，胰岛细胞存活率大于95%。结论：胆总管逆行灌注胶原酶Ⅴ（含DNaseI100U）原位消化分离

6、胰岛细胞，可有效避免胰腺胶状物质的产生，提高胰岛细胞的收获量与实验成功率；Hitopque-1077梯度离心纯化胰岛细胞的方法具有操作简单、便捷、经济等优点，纯化得到的胰岛细胞纯度与存活率高，功能活性强；使用改良后DMEM高糖培养液（15%FBS，50μmol/Lβ-巯基乙醇，10mmol/LHEPES）培养的胰岛β细胞形态完整，活力强，适宜用于胰岛β细胞培养。关键词：胰岛细胞，分离，纯化，培养，Hitopque-1077，梯度离心I宁夏医科大学硕士研究生学位论文第一部分大鼠胰岛β细胞分离及纯化Abs

7、tractObjective:ToscreenoutanoptimalmethodandconditionofisolatingandculturingpancreaticisletcellsforthesakeofprovidingactiveandfunctionalSDratpancreaticisletcellsforresearchontheroleandmechanismofmicroRNA-126(miR-126)inType2diabetesmellitus(DM2).Method:A

8、ftersuccessfuLanesthesiaofSDratsviaintraperitonealinjectionofchloraldurat,8mLCollagenVcontaining100UDNaseIwasadministeredbyretrogradeperfusionviathecommonbileduct.Afterinsitudigestion,SDratpancreaticisletcellswereisolatedandpurif