维生素k2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响和机制

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1、授予单位代码10089学号或申请号08010010055HebeiMedicalUniversity专业学位维生素K2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响和机制研究生：张睦清导师：徐金升教授专业：内科学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河

2、北医科大学所有。否则，承担相应法律责任-研究生签名:Ml导师主象学院领导盖章：萍^月釦日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。目录中文摘要…………………………………………………………………….1英文摘要…………………………………………………………………….4英文缩写…………………………………………………………………….8研究论文维生素K2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影

3、响及机制前言……………………………………………………………………9材料与方法……………………………………………………………10结果……………………………………………………………………19附图……………………………………………………………………21附表……………………………………………………………………26讨论……………………………………………………………………27结论……………………………………………………………………..29参考文献………………………………………………………………..30综述维生素K对血管钙化影响的研究进展……………………………33致谢…

4、………………………………………………………………………41个人简历……………………………………………………………………42中文摘要维生素K2对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及机制摘要目的：慢性肾脏病（ChronicKidneydisease,CKD）患者死亡的首要病因是心血管疾病（CardiovascularDisease,CVD)，血管钙化是导致CKD患者CVD发病率和死亡率增加的关键环节，CKD患者的血管钙化主要发生在血管中膜。血管中膜的主要成分是血管平滑肌细胞（VascularSmoothMuscleCells,VSMCs），研究发现，维生素

5、K2可以抑制血管中膜钙化，但其具体机制尚不明确。为了探讨维生素K2对血管中膜钙化的影响及作用机制，本实验以高磷诱导的VSMCs钙化为模型，观察了维生素K2对其核心结合因子α1（Corefactorofalpha1,Cbfα1）mRNA及蛋白和骨形态发生蛋白2（Bonemorphogeneticprotein2，BMP-2）、SMAD1、SMAD7、Axl（Anexelekto）、B-细胞淋巴瘤/白血病-2（B-celllymphoma/leukemia-2，Bcl-2)基因mRNA的表达变化以及细胞凋亡的影响。方法：1运用胸主动脉组织块贴壁法原代培养获取V

6、SMCs，进行形态学及免疫细胞鉴定。2实验分组：将VSMCs随机分为正常对照组、高磷组干预组、维生素K2干预组（10μmol/L）、维生素K2干预组（25μmol/L）及维生素K2干预组（50μmol/L），阴性对照组采用低糖DMEM含10%胎牛血清的正常培养基培养，高磷组在正常培养基的基础上加入10mmol/L的β-甘油磷酸制成高磷培养基培养，维生素K2干预组在上述高磷培养基的基础上加入维生素K2，使维生素K2的终浓度分别为10μmol/L、25μmol/L和50μmol/L。3钙化检测：VSMCs的钙化通过茜素红染色来检测，并用比色法检测其钙含量。4运

7、用RT-PCR方法观察了不同浓度维生素K2对VSMCs中核心结合因子α1（Corefactorofalpha1,Cbfα1）mRNA及蛋白，骨形态发生蛋白2（Bonemorphogeneticprotein2，BMP-2）、SMAD1、SMAD7、Axl（Anexelekto）、B-细胞淋巴瘤/白血病-2（B-celllymphoma/leukemia-2，Bcl-2)1中文摘要基因mRNA表达水平的影响。5运用Western-blot方法观察了不同浓度维生素K2对VSMCs中Cbfα1蛋白表达水平的影响。6运用流式细胞仪检测细胞凋亡率：先以0.25%胰酶

8、消化收集的各组细胞，再用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗2次，将细胞重悬