硫化氢对腹膜透析大鼠并发腹膜纤维化的防治作用

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1、MmSOOCHOWUNIVERSITY》/_/丄论文题目硫化氢对腹膜透析大鼠并发腹膜纤维化的防治作用研究生姓名高芦-It---.••.HH»指导教师姓名宋专业名称肾脏病学研究方向腹膜透析论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明s所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文

2、作者签名S9]fS>曰期^yO^^-/>苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密

3、论文•/论文作者签名：為ffe日期：导师签名：H緊曰期：>01X^0^1}硫化氢对腹膜透析大鼠并发腹膜纤维化的防治作用中文摘要硫化氢对腹膜透析大鼠并发腹膜纤维化的防治作用中文摘要目的：本研究探讨硫化氢（H2S）是否通过抗炎、抗纤维化作用，改善腹膜透析大鼠腹膜纤维化及腹膜转运功能。方法：1.体内研究：20只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组：0.9%生理盐水20ml/d腹腔注射；硫化氢（H2S）组：NaHS1μmol/kg*d加入0.9%生理盐水中腹腔注射；建模组：4.25%高糖腹透液(PDFs)20ml/d腹腔注射，第1,3,5,7天加入脂多糖（LP

4、S）0.6mg/kg腹腔注射；治疗组：高糖组造模同时予NaHS1μmol/kg*d腹腔注射。28天后行腹膜平衡试验(PET)，计算超滤量、D2h葡萄糖/D0h葡萄糖，评估腹膜转运功能。取壁层腹膜组织行HE染色、Masson染色等病理染色观察腹膜和胶原纤维厚度；免疫组化检测单核/巨噬细胞标志蛋白（ED-1）、单核巨噬细胞趋化蛋白（MCP-1）、转化生长因子（TGF-β1）、肌纤维蛋白（α-SMA）、纤维黏连蛋白（FN）、胶原蛋白-Ⅲ（Col-Ⅲ）和血小板-内皮细胞粘附因子（CD31）等炎症纤维化、新生血管形成指标的表达。2.体外研究：取正常SD大鼠，

5、分离培养大鼠原代腹膜间皮细胞，取第二代至第四代细胞用于实验研究。将细胞同步化处理后随机分为5组：对照组：细胞培养于正常培养液中；H2S组：细胞培养于正常培养液中，同时予NaHS300μM；建模组：正常培养液:2.5%PDF(V/V)=1:1；H2S低剂量治疗组：正常培养液:2.5%PDF(V/V)=1:1，同时予NaHS100μM；H2S高剂量治疗组：正常培养液:2.5%PDF(V/V)=1:1，同时予NaHS300μM。24小时后提取细胞总RNA、蛋白，RT-PCR检测各组MCP-1、ICAM-1、IL-6炎症因子mRNA的表达；Western-

6、blot检测各组α-SMA、FN等相关纤维化蛋白的表达。结果：1.体内研究：与对照组相比，建模组超滤量明显减少，D2h葡萄糖/D0h葡萄糖比值明显降低（P<0.05），而治疗组、H2S组上述变化不明显；HE染色示建模组腹膜结构紊I中文摘要硫化氢对腹膜透析大鼠并发腹膜纤维化的防治作用乱，腹膜厚度、腹膜间皮下炎症细胞浸润及胶原沉积较对照组显著增加（P<0.05），予NaSH治疗后，腹膜厚度、炎症细胞浸润、胶原沉积等明显减少（P<0.05）；免疫组化示，与对照组相比建模组ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及CD31等蛋白的表达

7、量显著增加（均P<0.05）；然而，与建模组相比，治疗组ED1、MCP-1、TGF-β1、α-SMA、FN、Col-Ⅲ及CD31的表达量显著降低（均P<0.05）。2.体外研究：与对照组相比，建模组腹膜间皮细胞MCP-1、ICAM-1、IL-6等炎症因子的表达明显增多，α-SMA、FN等蛋白的表达明显上调，予NaHS干预后上述炎症、纤维化因子的表达明显减少，差异有统计学意义。结论：1.高糖腹透液可诱导腹膜纤维化。2.外源性H2S对高糖腹透液引起的腹膜纤维化有防治作用。3.H2S改善腹膜透析大鼠腹膜纤维化的机制是通过抑制炎症反应、降低TGF-β1的表

8、达，进而抑制腹膜间皮细胞EMT、减少胶原蛋白沉积和新生血管形成而实现的。关键词：腹膜透析；腹膜纤维化；炎症；上皮-间充质转