桑树中三个氧化酶相关基因的克隆、序列分析及表达

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1、学校代码：10289分类号：s888.3密级：公开学号：129310007江苏科技大学专业硕士学位论文桑树中三个氧化酶相关基因的克隆、序列分析及表达研究生姓名李凤导师姓名赵卫国申请学位类别农业推广硕士学位授予单位江苏科技大学专业领域养殖论文提交日期2015年4月27日研究方向桑树遗传育种论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席程嘉翎评阅人2015年6月7日分类号：s888.3密级：公开学号：129310007桑树中三个氧化酶相关基因的克隆、序列分析及表达学生姓名李凤指导教师赵卫国研究员江苏科技大学二

2、OO一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgriculturalExtensionMolecularcloningofthreeoxidasegenesfromMulberry(MorusL.),sequenceanalysisandexpressionSubmittedbyLiFengSupervisedbyProf.ZhaoWeiguoJiangsuUniversityofSciencean

3、dTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印

4、件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要外界逆境胁迫会使得植物体内会产生大量活性氧而植物本身的代谢也会产生大量的活性氧，如果植物体内的活性氧不能及时清除，将会严重毒害植物的生长和发育。我国是桑树的起源中心，其中不少资源都具有果用价值、药用价值、经济价值等。因而

5、，开展桑树氧化酶基因和过氧化物酶基因克隆、功能验证及分析，不仅可以使桑树氧化酶基因和过氧化物酶基因在分子水平被我们认识到其在桑树不同条件下的表达调控情况，认识到桑树贝壳杉烯氧化酶、桑树过氧化物酶12以及桑树伯胺氧化酶在桑树中的作用和功能；而且为以后能够获得抵抗外界不良环境的桑树品种以及获得高产量高优质的桑树资源打下基础。1、桑树贝壳杉烯氧化酶基因克隆研究和对它们的表达分析及序列分析通过桑树cDNA文库以及软件的应用和各种实验技术，本文首次获得了1838bp的片段的桑树贝壳杉烯氧化酶基因并命名为MmKO，

6、含有开放读码框长为1551bp，编码516个氨基酸的蛋白，预测桑树贝壳杉烯氧化酶的蛋白质分子质量为58.563kD，等电点为7.917。属于p450超级家族。并与其他物种编码贝壳杉烯氧化酶的氨基酸进行同源性比对和其他物种的贝壳杉烯氧化酶的基因序列进行进化树分析。定量PCR结果表明，与正常生长环境相比，MmKO基因在干旱、盐、ABA、SA四种非生物环境胁迫条件下，其表达调控水平都在不同时间点上会有上调的变动趋势。2、桑树过氧化物酶12基因的克隆、序列分析及诱导表达分析通过桑树cDNA文库以及软件的应用和各

7、种实验技术，得到一段编码桑树过氧化物酶12（MmPOD12）基因的一段序列，获得含有完整开放阅读框的cDNA长1482bp，1个完整的开放阅读框序列长度为789bp，编码对应的氨基酸残基个数为350个。预测其桑树过氧化物酶12蛋白质分子质量为37.004kD，等电点为7.044。属于过氧化物酶家族基因。在氨基酸的同源性比对中，MmPOD12基因在各物种间具有一定的保守性，也有差异性，和川桑保持比较接近的亲缘关系。荧光定量PCR：MmPOD12基因的表达水平在干旱、盐、ABA、SA胁迫条件下都会产生不同成

8、都的调控变化。3、桑树伯胺氧化酶2基因的克隆、序列分析及诱导表达分析I江苏科技大学农业推广硕士学位论文通过已构建的桑树幼叶cDNA文库以及软件的应用和各种实验技术，获得的桑树伯胺氧化酶2含有完整开放阅读框的cDNA长2597bp，含有的开放阅读框序列比较完整并且长度为2364bp，编码氨基酸蛋白数量是787个。预测其桑树伯胺氧化酶2蛋白质分子质量为87.53kD，等电点为6.545。属于铜胺氧化酶基因家族。利用同源性软件对桑树和其他物种PA