蜱组胺结合蛋白的重组表达及其生物学功能分析

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1、学校代码：10270分类号:Q95学号：122200866上善呼说L夫爹硕士学位论文蜱组胺结合蛋白的重组表达及其生物学功能分析学院：牛命与环境糾学学院专业：动物学研究方向：云力物1生物！技术研究生姓名：王亚楠指导教师：搭1金林完成日期：2015年4月论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研宄成果。其他同志对本研宄的启发和所做的贡献均己在论文中做了明确的声明并表示了谢意。作者签名日期I论文使用授权声明本人完全了解上海师范大学有

2、关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名导师签名:期：n本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合上海师范大学硕（博)士学位论文质量要求。以下答辩委员会签名主席（工作单位、职称):委员：I^0^导师：。/AJ?/V^rSchoolCode:10270CLC:Q95StudentNumber:122200866ShanghaiNormalUniversityMasterDisser

3、tationRecombinantExpressionandBiologicalFunctionAnalysisofHistamine-bindingProteins(HBPs)ofticksDepartmentCollegeofLifeandEnvironmentScienceMajorZoologySpecialtyZoologicalbiotechnologyNameWANGYananAdvisorZHOUJinlinProfessorDateApril,2015上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：蜱组胺结合蛋白的重组表达

4、及其生物学功能分析学科专业：动物学学位申请人：王亚楠指导老师：周金林研究员摘要蜱是一种常见的吸血体外寄生虫，给畜牧业和人类的健康带来了严重的影响。蜱的寄生会引起宿主失血、不安和皮肤损伤，同时在叮咬过程中蜱可以传播多种疾病。蜱叮咬可以诱发宿主产生炎症反应、凝血反应和免疫反应等，为了克服宿主的这些反应，蜱的唾液腺通过分泌一些生物大分子干扰宿主的反应，如抗凝血分子、免疫抑制分子和抗炎症分子等，这些分子有成为治疗血凝相关疾病，肿瘤，以及自身免疫性疾病的药物的潜力，其中蜱组胺结合蛋白（Histaminebindingprotein）就是这些

5、分子中的一种。蜱组胺结合蛋白是由蜱的唾液腺分泌的具有特异性结合组胺的一类功能性蛋白的总称，是蜱的重要抗炎症分子之一。亚洲璃眼蜱隶属于硬蜱科璃眼属，为三宿主蜱，广泛分布于我国的西北部地区（新疆、内蒙、宁夏）以及中亚地区。本实验室成功从亚洲璃眼蜱唾液腺中克隆表达出组胺结合蛋白(HistaminebindingproteinofHyalommaasiaticum,HaHBP)。为了进一步深入研究HaHBP的功能特点，在已有的实验数据的基础上对亚洲璃眼蜱唾液腺中的HaHBP进行了重组表达及生物学功能分析。首先，对实验室保存的pGEX-4T

6、-1-HaHBP/BL21重组质粒的菌种进行活化，经扩大培养，16℃低温，1MIPTG诱导，GST树脂亲和层析纯化，获得了纯度较高的HaHBP-GST重组蛋白。其次，将编码HaHBP的基因片段克隆至真核表达载体pFastBacHTa，将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中，构建重组杆粒rBac-HaHBP，转染至sf9昆虫细胞，进行重组蛋白的表达纯化。经SDS-PAGE、Westernblot和IFA检测结果表明，HaHBP在Bac-to-Bac杆状病毒系统中稳定表达，重组蛋白大小与预期一致。将原核表达和真核表达的HaHBP重

7、组蛋白在不同浓度梯度的条件下与HRP-histamine共同孵育，进行组胺结合实验，结果表明，两种表达系统所表达的重组蛋白都具有组胺结合的能力。最后，分别通过涂抹和I摘要上海师范大学硕士学位论文滴鼻给药的方法探究HaHBP对二甲苯诱发小鼠耳肿模型和OVA诱发的小鼠哮喘模型的作用效果，实验结果表明，HaHBP对小鼠的耳肿和哮喘都具有一定的抑制作用。综上所述，本研究对组胺结合蛋白（HBP）的表达和生物学功能进行了初步探究，为研究新型蜱源抗组胺药物提供了新的思路。关键词：亚洲璃眼蜱；组胺；组胺结合蛋白；真核表达；小鼠过敏性哮喘模型；小鼠

8、耳肿模型论文类型：研究报告II上海师范大学硕士学位论文AbstractSubject：RecombinantExpressionandBiologicalFunctionAnalysisofHistaminebindingProteins(HBPs