瓦布贝母抑菌活性菌株的筛选鉴定及其次生代谢产物的初步研究

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1、分教号Ｒ２８４．３学号Ｓ２０１３５４０６四川巧化大学专业硕女学位论文瓦布贝母抑菌巧性菌株的筛选鉴定及其次生代谢产物的初步硏究苏雪梅Ｉ指导教师吴卫巧巧校外导师杨玉霞副研究员四川省中医药科学院学位类别农业推广硕±领域名称作物研究方向葫用植物巧源评价与利用‘－．Ｉ．护氏；２０１５年４月．＇－■－＊？＊！－‘广’＼＇．－，，？＇八，＇Ｓｉｃｈｕａｎ乂ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＰｒｏ化ｓｓｉｏｎａｌＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅ

2、ｅＤｉｓｓｅｉｉ：ａｔｉｏ凸Ｓｃｒｅｅｎｉｎａｎｄｉｄｅｎ村打ｃａ村ｏｎｏｆｇａｎ村ｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｅｓｔｒａｉｎｓｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉｆｒｏｍＦ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｉｒｓｅｃｏｎｄａｒｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｙＢｙ－ＭｅＳＵＸｕｅｉＤｉｒｅｃｔｅｄｂＰｒｏｆ．ＷＵＷｅｉｙＭａｏｒ：ＣｒｏｊｐＣｈｅｎｄｕＳｉｃｈｕａｎＲ民．Ｃｈｉｎａｇ，，Ａｒｉｌ２０１５ｐ，论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我

3、个人在导师指导下进行研究工作所取得的。成果尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：年月曰亦ｆ墙．关于论文使用授枚的声明、使用学位论文的规定目Ｐ：学校有权保留本人完全了解四川农业大学有关保留，并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阀和借阅，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文

4、。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在解密后适用本授权。＿＿年＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）－研究生签名：旁梅年月曰导师签名：心＞〇、ｊｒ年／月日摘要一植物内生真菌是类存在于宿主植物组织内，却又不引起植物病害的微生物，它们在长期的共同进化过程中与宿主形成了趋于稳定的互惠共生关系。植物内生真菌是一具有高度多样性的微生物资源，能产生多种不同药效价值的次生代谢活性产物，是、。类具备良好开发价值的微生物，可作为抗菌抗氧化及抗癌等天然药物的潜在来源由于内生真菌

5、具备抗菌活性，有望成为微生物农药制剂的重要来源，这对于农业病虫害的生物防治也将产生重要意义。本文Ｗ瓦布贝母内生真菌作为研究对象，对菌株及其次生代谢产物的抑菌活性进行了筛选，并对具有高效广谱抑菌活性的内生真菌菌株进行了茵种鉴定和发酵条件的优化。主要研究结果包括Ｗ下几个方面：１、对分离自瓦布贝母鱗茎的５０株内生真菌进行了抑菌活性的多重筛选。首先运用菌饼法，，将４种指示细菌（革兰氏阳性和革兰氏阴性菌）和１种指示真菌作为指示菌一５０４１株内生真菌对对株内生真菌进行了抑菌活巧的初筛，其中有种Ｗ上指示菌具有抑制作用，占菌株总数的８２．００％；有２３株内

6、生真菌对Ｈ种Ｗ上指示菌具有抑制作用，占菌株总数的４６．００％。采用双层平板法，将上述试验中对Ｈ种上指示菌具有抑制作用的２３株内生真菌一进行抑菌活性的复筛。结果发现，有１５株内生真菌对种Ｗ上指示菌有显著抑菌活性，占总菌株的比例为６５．２２％；ＷＢＳ００１、ＷＢＳ００２、ＷＢＳ００８和７ＷＢＹ２分别对四种指示菌均具有较强的抑制活性。一皿打孔法，将复筛时发现的对两种ｌ上采用平ｔｉ指示菌具有抑制作用或对种指示菌具有湿著抑制作用（Ｗ２１和１ＷＢＹ２）的１０株内生真菌，采用供试植物病原真菌作一一为指示菌进行进步的筛选。结果发现，对种及Ｗ上病原真苗

7、有显著抑菌活性的内８的比例为８０．００％。其中对玉米小斑病菌的抑制率，菌株生真菌有株，占总菌株ＷＢＳ００８高达５７．３５％、ＷＢＳ００２高达５０．００％，ＷＢＳ００１对核盘菌的抑制率也高达５２．４４％。再将上述试验中对四种及Ｗ上植物病原真菌具有显著抑制作用的菌株（ＷＢＳ００１、ＷＢＳ００２、ＷＢＳ００８），扩大植物病原菌种类和数量，运用相同的平皿打孔法进行抑菌试验。结果表明，Ｗ上３株内生真菌菌株均分别对Ｈ种及Ｗ上病原真菌具有盎著抑菌活性。Ｉ２、将最终筛选出的３株具有广谱抑菌活性的菌株进行活性部位的筛选，Ｗ确定抑菌