二株放线菌抗肿瘤活性次生代谢产物的初步研究

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1、云南大学生命科学学院硕士学位论文MasterDissertation二株放线菌抗肿瘤活性次生代谢产物的初步研究PreliminaryStudiesonAntitumorBioactiveComponentsfromtheSecondaryMetabolitesoftwoActinomyceteStrains研究生：戎贺Candidate：RongHe指导教师：李一青副研究员Supervisor：Assoc．Prof．LiYiqing云南大学微生物研究所YunnanInstituteofMicrobiology,YunnanUniversit

2、yMay,2013独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：基塑j。日期：边屋：笸兰论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后

3、应遵循此规定)研究生签名：盔丝导师签名：垄二盔日期：鲨!!：垒：!本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：导师签名：——日期：云南大学硕士学位论文二株放线菌抗肿瘤活性次生代谢产物的初步研究摘要自然界存在的微生物种类繁多，微生物的代谢产物极其复杂多样，是新药研发的丰富来源。多年来已从微生物次生代谢产物中发现了为数众多的抗肿瘤活性物质。放线菌(actino

4、mycete或actinobacteria)是原核生物中高G+C含量的革兰氏阳性细菌类群，在自然界中分布很广，是一类数量大、种类多、发现新药先导化合物的重要微生物资源，是抗生素和其它生物活性物质的重要产生菌。本文作者对经前期研究证实具有抗肿瘤活性的l0株放线菌菌株进行了化学筛选，依据菌株次生代谢产物的薄层层析(TLC)结果，确定菌株的代谢产物是否具有化学多样性，是否是具有合成新颖结构化合物能力的菌株，最终确定了化学多样性较好的二株活性菌株YIMR4及ⅥMR8作为后续次生代谢产物研究的对象。经初步分类鉴定，菌株YIMR4及YlMR8均为链霉菌

5、(Streptomycessp．)。本文采用五种培养基对菌株ⅥMR4及YIMR8进行少量发酵后，发酵提取物TLC筛选的结果表明：菌株ⅥMR4及YIMR8均采用301存培养基发酵时，其发酵产物的多样性较好，且采用该培养基进行发酵还能排除大豆异黄酮己知培养基成分的影响。因此，最终采用301撑培养基对这二株菌进行后续的放大发酵。通过对菌株ⅥMR4进行放大发酵并应用现代色谱分离技术对其发酵产物进行分离纯化，从菌株ⅥMR4的发酵上清液乙酸乙酯萃取液及菌丝体丙酮提取物中共分离得到了7个化合物，通过波谱数据，确定了其中5个化合物的结构，它们分别为：4-(

6、(6-hydroxyphenazin—l—y1)(methyl)amino)benzoicacid(RH-1)，Isolumichrome(RH一2)，Cyelo一(Leu-Val)(RH-3)，Cyclo·(Leu—lie)(RH-4)，Strepphenazine(1tH-5)。其中化合物RH-5为一新结构化合物，由于它源自链霉菌，因此我们暂将其命名为Strepphenazine。化合物RH．6及RH．7的分子量经质谱测定分别为636和541。但由于量太少，无法得到清晰的NMR图谱数据，其结构有待后续积累更多化合物数量后确定。云南大学硕

7、士学位论文二株放线菌抗肿瘤活性次生代谢产物的初步研究通过对菌株ⅥMR8进行放大发酵并应用现代色谱分离技术对其发酵产物进行分离纯化，从菌株YIMR8的发酵上清液乙酸乙酯萃取液及菌丝体丙酮提取物中共分离得到了5个化合物，通过波谱数据，确定了这5个化合物的结构，它们分别为：AloesaponarinII(RH-8)，2-Methoxy—l，4一naphthoquinone(RH·9)，Streptetramertide(Rn-10)，4，4’，6-Trihydroxyaurone(RH一11)，Leueine(RH一12)。其中化合物RH．10为

8、一新结构化合物，由于它源自链霉菌，因此我们暂将其命名为Streptetramertide。以上所得到的单体化合物中，据相关文献报道，化合物RH．1、RH-4及RH．9具有抗肿瘤活