水稻纹枯病菌pg基因的克隆、表达及致病性分析

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2、物病理学．＿．＾ｇ论文提交日期：２０１５年５月论文答辦日期：２０１５年Ｓ月：？身：２０１５；年６月学位授予单位扬州大学学位授予曰期＿＿．．０ｆ＇：答辩委员会主席：心徐辟．卷—……．—．＾４＾论文评阅人：刘邮洲副研究员ｘ左部遞、—．—討，、、备心綠；心ｒ、．、■－－Ｖ：；―乂：．乂．；．Ｗ，，，、．．．．．■乃卢冷在，＾ｄ．１．？、’毒、．：‘々八冰＾；：；：公分迷聲，—．矿．‘扛夺＇冲＇－．－一禾－＇＾一‘－、、考、１５月：？．年５．，２０／、＾’■－、Ｖ中＇

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4、育５１．３．２品种的抗性机理６１．４防治及存在问题７１．４．１农业防治措施７１．４．２化学防治措施７１．４．３生物防治措施８２植物病原真茜致病基因种类８２．１与侵染结构形成有关的基因９２．２与细胞壁降解有关的基因９２．３与寄主代谢反应产物有关的基因１０２．４毒素基因１１２．５与信号传导有关的基因１１２．６其他功能的致病基因１１３植物病原真菌基因研巧现状１２３１．１真茜胞壁降解酶种类２３．２户Ｇ細１２３．３户Ｇ基因编码产物及其功能１３４基因的异源表法

5、１４４１４．原觀法１４１．２龍表泣４５选题的目的和意义１５材料与方法１６１６１供试材料１１．生物材料１６１１．２主要试剂６１１．３＆器６１．４培养基１７１１．５胆存液配制８１．６溶液配制１８２核酸的提取２０２．１基因组ＤＮＡ的提取２０２．２总民ＮＡ的提取２１２．３质粒的提取２２３戶Ｇ基因的克隆与序列分析２２３．１ＰＣＲ扩增及产物回收２２３．２ＤＨ５ａ感受态细胞的制备２４３．３目的片段的连接与转化２４３．４阳性克隆子的筛选与测序２

6、５３．５ＰＧ基因及其表达产物的生物信息学分析２５３．５．１ｆＧ基因序列分析２５３．５．２尸Ｇ基因表达产物的生物信息学分析２６４ｆＧ基因的原核表达２６４１．原核表达载体的构建２６４丄ＣＲ扩增及产物回收１特异性引物设计２６、Ｐ４．１．２目的片段和原核表达载体双酶切及回收纯化２７４１．．３目的片段与载体的连接２７、转化、验证与测序４．２ＢＬ２１感受态细胞的制备２７４．３阳性重组质粒转化ＢＬ２１．２７４．４阳性转化子的筛选２８４．５ｆＧ基因的诱导表达２８４６ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表达产物

7、的２８．５戶Ｇ基因的真核表达２８５．１真核表达载体构建２８５丄１特异性引物话计、ＰＣＲ扩增及产物回收巧５１２目巧．．的片段和真核表达载体双酶切及回收纯化５１．．３目的片段与载体的连接巧、转化、验证与测序５．２毕赤酵母ＧＳ１１５感受态细胞的制备３０５．３阳性重组质粒的线性化与转化３０５．４转化子的甲醇利用表型筛选３１５．５转化子的ＰＣＲ鉴定３１５．６外源基因多拷贝整合转化子筛选３１５．７户Ｇ基因的诱导表达３２６表达产物的生物学活性测定３２６．１表达产物的酶活性测定３２６丄１ＤＮＳ

8、法测定酶活性３２６