恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质pf3d7_1361800的表达与功能分析

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1、分类号：R382.3+1单位代码：10183研究生学号：2012852065密级：公开吉林大学硕士学位论文恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质PF3D7_1361800的表达与功能分析ExpressionandfunctionanalysisofPlasmodiumfalciparumnewmerozoiteproteinPF3D7_1361800作者姓名：魏晓艳专业：预防兽医学研究方向：兽医公共卫生指导教师：陈启军教授培养单位：动物医学学院2015年12月恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质PF3D7_1361800的表达与功能分析Expressionandfunctionanalys

2、isofPlasmodiumfalciparumnewmerozoiteproteinPF3D7_1361800作者姓名：魏晓艳专业名称：预防兽医学指导教师：陈启军教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年12月04日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位巧个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使巧不在此限）。。否则，应承担侵权的法律责任吉林大学硕±学位论文原创性声明本人郑重声明，，：所呈交学位论文是本人在指导教师的指导下独立

3、进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名；棘Ａ也日期；如年／文月日＾中文摘要恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质PF3D7_1361800的表达与功能分析疟疾是疟原虫引起的一种专性细胞内寄生虫病。至今为止疟疾仍是一个发病率和死亡率都不容忽视的严重的公共卫生问题。据统计，有将近半数的世界人口生活在疟疾高发区，每年有1.9-3.11亿人感染疟疾，造成约100万人死亡

4、，其中绝大多数为5岁以下的非洲儿童。感染人的五种疟原虫中，以恶性疟原虫造成的危害最为严重。其主要的疾病症状和病理变化都是由恶性疟原虫生活周期的红细胞内期引起的。肝素和硫化肝素被认为是疟疾治疗的候选药物，对肝素的研究结果显示其可以抑制裂殖子侵入红细胞，阻碍染虫红细胞与未染虫的红细胞之间的粘附以及玫瑰花环的形成。PF3D7_1361800是通过亲和层析和高通量质谱技术筛选出的能够与肝素结合的蛋白质，但对该蛋白的研究尚未见任何报道。本实验通过研究PF3D7_1361800在恶性疟原虫3D7株中的转录、表达、亚细胞定位及功能，试图揭示该蛋白在虫体入侵过程中的作用机制。本实验首

5、先以Seryl-tRNAsynthetase为内参基因，通过荧光定量PCR技术分析PF3D7_1361800基因在恶性疟原虫3D7株红内期中的转录情况；然后根据氨基酸序列的亲水性分析结果，选取了三段亲水性较好的区域，原核表达和纯化重组蛋白质，免疫新西兰大耳白家兔并制备特异性抗血清。通过不同时期虫体的Westernblot试验、间接免疫荧光共定位试验和免疫电镜试验对PF3D7_1361800在虫体内的表达和亚细胞定位情况进行分析；然后分段表达蛋白质序列，筛选出与红细胞发生粘附反应的肽段，并进行特异性肝素结合试验，研究其在入侵过程中的作用机制；最后进行体外入侵抑制试验和疫

6、苗可行性评价。结果表明PF3D7_1361800基因在虫体红内期内均有转录，以40h转录水平最高；不同时期虫体的Westernblot试验显示，其表达水平存在很大差异，裂殖体期的表达量最高；间接免疫荧光共定位和电镜试验结果显示，该蛋白定位于裂16221918殖子表面，推测其为裂殖子表面蛋白；PF3D7_1361800（Arg-Val）能够与红细胞和多糖类物质肝素特异性结合，为进一步研究PF3D7_1361800在入侵过I程中的作用机制奠定基础；该蛋白可以诱发宿主产生免疫应答反应，Anti-PF3D7_1361800IgG具有较好的入侵抑制作用，表明该蛋白有望成为疟疾疫

7、苗研制与开发的有效的抗原靶标。关键词：恶性疟原虫，裂殖子蛋白，亚细胞定位，功能IIAbstractExpressionandfunctionanalysisofPlasmodiumfalciparumnewmerozoiteproteinPF3D7_1361800MalariaisanobligateintracellularparasitediseasecausedbyPlasmodium,whichisstillaseriouspublichealthproblemthatcannotbeignored.TheWorldHealthOrganiz