藏猪源大肠杆菌和肠球菌耐药性调查及其耐药机制的研究

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1、分类丹：单位代码：密级号：博士学位论文藏猪源大肠扞菌和肠球菌耐药性调查及其耐药机制的研究研究生：李鹏指导教师：林德贵教授申请学位门类级别：农学博士专业名称：临床兽医学研究方向：兽医临床所在学院：动物医学院年月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、

2、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）导师签名：时间年『月日本研究受西藏自治区年度地方自然科学基金项目“西藏动物源细菌的抗生素耐药表征及分子流行病学研究”资助摘要大肠埃希氏菌、和肠球菌是人和动物肠道共生菌，可以作为社区和农场中各种细菌耐药性发生情况的指标菌，而藏猪原产于西藏地区，在藏区普遍将藏猪放养于自然环境中，自由觅食，从不用药

3、。对藏猪源大肠杆菌和肠球菌开展耐药性调查及其耐药机制研究，在兽医及人医领域均有重要的公共卫生意义。试验菌株分离自年从西藏林芝市觉木沟附近山林采集的份新鲜藏猪粪便样本，该地区藏猪采用放牧式养殖方式，管理十分粗放，调查未发现使用抗生素和抗菌促生长剂。经选择性培养、生化鉴定和确证，共分离出株大肠杆菌和株肠球菌，分离率分别为和其中屎肠球菌株占肠球菌的、粪肠球菌株占、希拉肠球菌株占、蒙氏肠球菌株占，首次分离到猪源蒙氏肠球菌。使用纸片扩散法、微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行种常用抗菌药物敏感性试验，结果显示，受试大肠杆菌表现出对四环素（较高水平的耐药率，对氟苯尼考（、氨苄西林（、萘啶酸（、复方新诺明（°

4、。）、链霉素（和头孢噻呋表现中等水平耐药，对环丙沙星、庆大霉素和大观霉素的耐药率则比较低，未发现阿莫西林克拉维酸耐药大肠杆菌菌株。有株大肠杆菌对三类以上的抗菌药物同时表现出耐药性，多重耐药率为。使用纸片扩散法、微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定对分离的肠球菌进行种常用抗菌药物敏感性试验，结果显示受试肠球菌对苯唑西林、克林霉素和红霉素表现出高水平耐药，这与肠球菌的固有耐药有关，肠球菌对四环素（表现出较高水平的耐药率，对氟苯尼考（表现中等水平耐药，对青霉素（和环丙沙星（的耐药率则比较低，对氨苄西林、左旋氧氟沙星、氨基糖苷类药物的耐药率很低，未发现对阿莫西林克拉维酸或万古霉素耐药肠球菌菌株，统计发现，除

5、四环素、红霉素和青霉素外，四种肠球菌对其他药物耐药性无显著性差异。通过方法对所有分离的菌株进行耐药基冈检测，结果显示，大肠杆菌中携带株（、株（、株（、株（、铁、株（、吹株（未检出、、、、、、、’、和耐药基因，发现内酰胺酶基因与基因的连锁流行；肠球菌中携带株（、株（、次株（，有两株氟苯尼考耐药菌株未检出、和测序结果显不检出的全部为，检出的有株为么株为全部为。应用脉冲场凝胶电泳分型技术对携带耐药基因的大肠杆菌和对氟苯尼考耐药肠球菌进行研究，结果显示，内酰胺酶基因性大肠杆菌、基因阳性大肠杆菌和基因阳性大肠杆菌中存在克隆现象，氟苯尼考肠球菌耐药菌种的同源性较低，未发现克隆传播，提示内酰胺类药物、喹诺酮

6、类药物和氟苯尼考的耐药性在藏区藏猪源大肠杆菌中存在垂直传播，大部分氟苯尼考耐药基因则是通过水平转移的途径在藏区藏猪源肠球菌中传播。综上所述，藏猪源细菌除四环素外，对其他常见抗菌药物敏感性较好，耐药基因的检山率较国内其他养殖业发达地区都低。但是大部分耐药基因都是通过水平转移的途径在藏猪源细菌中传播，提示相关部门要继续严格控制抗菌药物在藏猪养殖过程中的使阳，另外耍限制藏猪活动空间，加强饲养管理，避免人员和其他动物随意进入的可能。关键词：藏猪，大肠杆菌，肠球菌，耐药性，耐药基因AbstractEscherichiacoliandEnterococcusarecommensalbacteriainhu

7、manandanimalintestinal,whichareregardedasindicatororganismforantimicrobialresistanceinthecommunityandfarms.TibetanpigoriginatedinTibetregion,whichisfree-ranginginitsnaturalenvironmentwithadequatewater