艾灸血清对cajal间质细胞内、外游离ca2+浓度及ip3r、ryr表达的影响

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1、三專嫺临束嗲研究分类号：学校代码：密级：学号：湖南中医药大学硕士学位论文艾灸血清对间质细胞内、外游离浓度及、表达的影响学科专业：针灸推拿学针灸推拿临床应用研究方向：及机理的研究作者姓名：胡薇导师姓名、职称：常小荣教授学位类型：专业学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位学位、证书而使用过的材料。与我共同对本研究所作过重要贡献的单位及个人均已在论文中作了明确说明并致谢

2、。作者签名：士《年夂月曰关于学位论文使用授权说明本人完全了解湖南中医药大学有关收集、保留及使用学位论文的规定，即：学校可以釆用复印、缩印或其它手段保存学位论文；可以公布学位论文的全部或部分内容，允许学位论文被查阅和借阅；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文或通过国内有关权威机构收录论文全文，向社会提供信息服务。保密论文在解密后守此规定、年上月沾曰艾灸血清对间质细胞内、外游离浓度及、表达的影响中文摘要目的：以功能性消化不良间质细胞为研究对象，研究艾灸足三里大鼠血清对乳鼠小肠间质细胞（内三憐酸肌醇受体，，和斯里兰卡肉桂碱受体，表达的影响，以及探索该细胞内外离子

3、的浓度，揭示艾灸足三里治疗功能性消化不良，调节胃肠运动的作用机制。摊：、制备血清，先将只大鼠进行随即分为三组，正常组，模型组，艾灸组，每组只。除正常组外，其余组大鼠依据中医理论和消化不良的病因学理论模拟动物模型按文献介绍的方法，采用夹尾剌激引发大鼠打斗造模方法经行造模，造模天。造模结束后艾灸组大鼠给予艾灸足三里治疗丨天，其他组大鼠在艾灸组治疗的同时给予捆绑剌激组大鼠均按的剂量灌服生理盐水，后制备相应组血清。、分离乳鼠小肠进行无菌条件下原代培养，并用反复贴壁法对细胞进行纯化，经形态学观察和免疫荧光学鉴定确定为该细胞后，用功能性消化不良模型动物血清建立“功能性消化不良模

4、型”。、采用逆转录聚合酶链反应技术检测间质细胞内、的含量，微板法检测间质细胞内、外浓度的变化，法检测间质细胞内、的蛋白表达，从而揭示艾灸足三里治疗功能性消化不良调节胃肠运动的作用机制。结果：、形态学观察及免疫荧光学鉴定倒置显微镜下观察形态学变化体外培养成功的具有特殊的形态特征。原代接种于培养瓶或培养板中，即可贴壁变形，细胞呈三角形或梭形，可有少量短突起。第天可见细胞形成与神经轴突类似的长突起。天后，可以伸出二级、三级突起、突起间可相互连接成复杂的网状结构，这种连接是其慢波功能的结构基础。免疫荧光学鉴定：在免疫荧光显微镜下观察表面呈阳性，胞体和突起均显著着色，部分细胞

5、发出长突起。功能性消化不良细胞模型建立：通过形态学观察，功能性消化不良模型细胞形态发生明显变化：细胞变扁平，突触连接紧密，细胞缝隙变小，网络连接不明显。、与正常培养的间质细胞相比，大鼠血清干预后的间质细胞内浓度下降，细胞外浓度上升、；与大鼠血清干预后间质细胞相比，艾灸大鼠足三里血清干预后的间质细胞内浓度上升，细胞外度下降（尸。、法检测结果显示，与正常培养的间质细胞相比，大鼠血清干预后的间质细胞内、的蛋白表达均下降；与大鼠血清干预后间质细胞相比，艾灸大鼠足三里血清干预后的间质细胞内、的蛋白表达均上升。、法检测结果显示，与正常培养的间质细胞相比，大鼠血清干预后的间质细胞

6、内、的含量均下降（尸；与大鼠血清干预后间质细胞相比，艾灸大鼠足三里血清干预后的间质细胞内、的含量均上升（尸。结论：原代细胞培养成功：从大鼠乳鼠小肠组织中可成功分离并培养出间质细胞。、功能性消化不良细胞模型建立成功：功能性消化不良模型大鼠血清加入正常细胞之后，成功复制功能性消化不良细胞模型。、艾灸大鼠足三里血清对间质细胞内、外浓度及、蛋白表达及含量的异常变化具有调节作用。关键词：功能性消化不良；间质细胞；艾灸血清AbstractObjective：，，，，：：，，，，，，，Results1.ICCmorphologyandimmuneofluorescenceiden

7、tification：：，：：：，，，：，〈。，，；，CajalcomparedtoFDratsserummoxibustionZusanlicontentofdryprognosisinterstitialcellsofCajalIP3RandRyRMrnawereincreased(P<0.01).Conclusion：：：目录时鮮中英文对照表引言实验職实验材料、方法与检测实验材料实验动物实验环境实验试剂实验用品仪器设备实验方法动物模型造模取穴及艾灸方法各组血清制备细胞培养基本操作形态学观察及免疫荧光学鉴定实验分组检测微板法检测间质细胞内、外游离浓度法检测间