白藜芦醇对hcv增殖影响的研究

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1、白藜芦醇对HCV增殖影响的研究ResveratrolaffectsHepatitisCviruspropagation作者姓名：ChauPingsaymangManpoong专业名称：内科学指导教师：牛俊奇教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年06月07日JilinUniversityNormanBethuneCollegeofMedicineTheFirstHospitalofJilinUniversityRESVERATROLAFFECTSHEPATITISCVIRUSPROPAGATIONThesispresentedbyCHAUPINGSAYMANGMANPOO

2、NGFortheDegreeofMDinInternalMedicine(Hepatology)UnderSupervisionofPROFESSORJUNQINIUDepartmentofHepatologyTheFirstHospitalofJilinUniversitySubmittedtoInternalMedicine(DepartmentofHepatology)TheFirstHospitalofJilinUniversityNormanBethuneCollegeofMedicineJilinUniversity中文摘要白藜芦醇对HCV增殖影响的研究HCV感

3、染是日益受到关注的全球公共卫生问题，是慢性肝脏疾病的主要病因之一。近1.3-1.7亿的人口是慢性HCV感染者，占世界人口的2-3%。慢性HCV感染者，20年后进展为肝硬化的概率为4-24%，30年后罹患原发性肝癌的概率为1–3%。HCV治疗随着对HCV基因组和分子病毒学领域的深入研究而取得了新的进展，HCV蛋白酶抑制剂（DAA）的出现更是将该领域的研究推向巅峰。自2011年9种DAA药物的上市，在HCV治疗上，获得高达≥90%持续的病毒学应答率（SVR）突破性的进展,且有较小的副作用；然而，高额的治疗费用仍是限制大多数新兴的DAA药物应用的重要因素，大部分急需治疗的患者不能

4、及时用药导致病毒清除的失败。虽然在过去的10余年，HCV感染的治疗取得了很多突破性的进展，但目前仍未有获得审批的疫苗，同时DAA药物的高额费用限制了DAA药物的使用，这使新的治疗手段的开发尤为必要。白藜芦醇(RVT)是一种存在于多种植物及水果中的多酚类化合物。研究表明，这种酚类合成物是长寿基因（sirtuin）的强效激活剂，该基因与寿命的长短有关，同时被认为是饮用红酒时产生多酚类化合物中最为有益的成分，也被称为：法国悖论（法国人酷爱美食，平时饮食中摄取大量高卡路里和高胆固醇的食物，但得心血管疾病的几率却比英语国家的人要低得多）。多酚白藜芦醇分子中含有亚甲基桥隔开的两个苯环的

5、分子，是第一个发现能够通过刺激的SIRT分泌发挥作用。Sirtuins1-7（SIRT1-7）属于第三类脱乙酰基酶，它依赖于NAD+的发I挥活化作用。SIRT可以参与基因抑制，代谢控制，细胞凋亡和细胞存活，DNA修复，神经保护和老龄化等调节作用。到目前为止研究最广泛的一直是SIRT1。AMPK和SIRT1是构成RVT的两个关键指标。RVT可以抑制线粒体ATP生产，导致了更高的AMP/ATP比和AMPK的LKB1依赖性活化。然后，AMPK可以提高NAD+供应，该辅因子能够提高SIRT1的酶活性，从而改善速率限制。本研究的目的旨在探讨白藜芦醇对HCV繁殖周期的影响。据报道，白藜

6、芦醇有抗肿瘤、抗炎症、抑制肥胖以及抗细菌的特性，同时又具有保护心血管系统的功能。白藜芦醇在非酒精性肝脏疾病中具有升高炎症因子的作用。此外，前期研究表明白藜芦醇可以抑制人类巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱疹病毒(HSV-1)、水痘-带状疱疹病毒和甲型流感病毒的复制。在本研究中使用huh7.5.1细胞系来完成实验，首先对白藜芦醇的细胞毒性进行评价，在两个细胞培养基中分别加0ug/ml、1ug/ml、3ug/ml、5ug/ml、6ug/ml、7ug/ml、8ug/ml、10ug/ml、13ug/ml，其中一个培养基培养48h、另一个培养96h，之后用MTT试剂盒检测细胞活性，发现0

7、-5ug/ml时,细胞大多数都有活性，然而6-13ug/ml时细胞死亡明显，因此白藜芦醇通过评价，最终选择出没有细胞毒性的剂量。本实验通过检测细胞培养衍生的HCV颗粒（HCVcc）中的JCR-2a进行研究，JCR-2a是一种新颖的单顺反子海肾荧光素酶受体病毒，这种病毒是通过HCV2a型转染质粒Jc1后得到。JCR-2a标记的HCV颗粒可以在体外存在，因此，是一种广泛使用丙型肝炎病毒完整的复制周期模型。II首先，将JCR-2a转染细胞，4h后加不同浓度（0、1、3、5ug/ml）的白藜芦醇,继续培养72h,向细胞培养