2型糖尿病及其微血管并发症患者血清microrna表达谱筛选及临床价值研究

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3、声明本人郑重声明；所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研。究工作和取得的研究成果本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研巧成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名；日期；学位论文使用授权声明研巧生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可＾＾＾昔阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可Ｗ采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可Ｗ向国家有关

4、机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）；；保密论文注释本学位论文属于保密论文，密级保密期限为年。学位论文作者签名：指导教师签名；曰期：日期：摘要摘要目的：筛选２型糖尿病（了＞＾６２（１１化６｛６５１１６１１加５了２〇］＼／１）及其微血管并发症（了６，＞＾２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｍｉｃｒｏｖ化ｃｕｌａｒｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｔ２ＤＭＣ）患者特异变化血清微小核糖核酸ｉｃｒｏ民ＮＡｉＣ的ｍ，ｍＲＮＡ表达谱，评价其对Ｔ２ＤＭ及Ｔ２ＤＭ诊断（）、鉴别诊断和病

5、情监控临床价值。一￣方法：收集２０１３年９月２０１４年５月间南京军区总院内分泌科收治的新发或个月内未经任何治疗的Ｔ２ＤＭ及Ｔ２ＤＭＣ各８７例，同时收集同期在医院体检中也年龄、性别完全匹配的健康体检者８７例做为正常对照。首先采用高通量、高灵敏度的低密度芯片技术（ＴａｑＭａｎＬｏｗＤｅｎｓｉｔｙＡｒｒａｙ，ＴＬＤＡ）对Ｔ２ＤＭ、Ｔ２ＤＭＣ及健康对照各２５例样本分别组成的混合血清中７６８种ｍｉＲＮＡ的表达水平进行检测，初筛Ｔ２ＤＭ和Ｔ一组血清ｍ２ＤＭＣ特异变化的ＲＮＡＰＣＲ技术ｉ；然后运用准确的实时芙光定量ｕａｎａ－ｍｅｍ－ｔｉｖｅｒｅａｔ

6、ｔｏｎＲＴＰＣＲＲＮＡＴＬＤＡｑ化ｌｉｏｌｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｉｉ（ｐｙ，ｑ）对初筛ｍ在所一一使用的同批样本中进行复筛步运用ＲＴ－ＰＣ民技术在另外Ｈ组（复筛姐）；进ｑＴ２ＤＭ、Ｔ２ＤＭＣ和健康对照各６２例样本中对复筛结果进行验证（验证组），筛选Ｔ２ＤＭ２Ｄ一及Ｔ组ｍ，运用酶联免疫吸附法ＭＣ患者血清中稳定变化的ｉＲＮＡ。同时（－ｌｅｎｚｍｅｉＳＡｙｉｎｋｅｄｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａ乂ＥＬＩ）测定全部患者及对照血清样本中氧化－ＯＸＬＤＬ－低洽度脂蛋白（）、氧化脂蛋白（ａ）ｏｘＬｐａ、糖蛋白氧化低密度脂蛋白［（）］龄－

7、ＧＰ－－－复合物（２ＩＯＸＬＤＬ）和（ａ）复合側２ＧＰ＾Ｌ（ａ）平，运用Ｐ於糖蛋白脂蛋白ｐｐ］的水Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析和逻辑回归分析患者特异变化血清ｍｉＲＮＡ与上述脂蛋白、临床指标相关性及是否为Ｔ２ＤＭ及Ｔ２ＤＭＣ独立危险因素。结震ＴＬＤＡ结果显示，Ｔ２ＤＭ及Ｔ２ＤＭＣ患者血清ｍｉ民ＮＡ表达谱与健康对照相比具有明显差异，５３种ｍｉ民ＮＡ在Ｔ２ＤＭ及Ｔ２ＤＭＣ患者血清中较对照组表达上升，１ｉ１７种ｍＲＮＡ在患者表达下降。结合ＴＬＤＡ初筛及文献调查结果，我们选取了１２－化－种