冠心病患者血浆microrna表达谱的筛选及其临床意义研究

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1、R541公开分类号：____________密级：______________ＵＤＣ：____________单位代码：______________11646硕士学位论文论文题目：冠心病患者血浆microRNA表达谱的筛选及其临床意义研究学号：_________________________1211101027姓名：_________________________陈小良内科学专业名称：_________________________医学院学院：_________________________周建庆教授指导教师

2、：_________________________论文提交日期：2015年04月15日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeMicroRNAExpressionProfileinCoronaryArteryDiseasePatientsandtheImpactofMyoDCandidate：ChenXiao-LiangSupervisors：ProfessorZhouJian-qingFacultyofMedicineNingboUnivers

3、ityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADateApril15,2015独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论

4、文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________冠心病患者血浆microRNA表达谱的筛选及其临床意义研究中文摘要研究背景冠心病（CAD）是一种严重威胁人类健康的疾病之一，且发病率呈逐年上升趋势，而早期诊断和治疗冠心病能有效降低其死亡率；但目前尚无

5、理想的诊断冠心病的生物标志物，因此发展一种新的、有更高的敏感性和特异性的生物标志物具有重要意义。MicroRNA（miRNA）是一类长度为19~24个核糖核苷酸的非编码内源性小单链RNA分子，且在心血管系统高度表达，几乎参与调控了心脏所有的病理生理过程，在心脏的正常发育、冠状动脉粥样硬化、心肌细胞损伤等过程中均发挥着重要作用。近年来研究发现血浆中miRNA能稳定存在，且随疾病发生发展而表达水平发生改变；因此，血浆miRNA检测可能成为冠心病诊断和治疗的理想生物标志物；而目前这方面的研究尚很少。目的:本研究的目的是筛选

6、出冠心病患者血浆中与正常人血浆相比存在显著差异的miRNAs；同时进一步研究上游转录因子对miRNA(s)的调控作用,为miRNA(s)在冠心病发病机制中的调控作用提供实验基础。方法:选择2012年9月至2013年10月在宁波市医疗中心李惠利医院心血管内科就诊患者，冠心病组为通过冠状动脉造影诊断至少有一条或一条以上的主干冠状动脉狭窄大于50%或以上的患者;正常对照组为通过冠状动脉造影诊断冠状动脉未见狭窄或仅有心肌桥病变的患者。运用miRNA基因芯片技术初步筛选冠心病病人和正常健康者血浆中的miRNA表达谱，每组各3例

7、样本，然后通过对基因芯片结果进行聚类分析，并对冠心病组中表达显著升高且差异倍数>5倍的miRNAsI进一步采用qRT-PCR技术进行扩大样本量(冠心病组:120例,正常对照组120例)验证，以寻找在冠心病中有显著差异表达的miRNAs。同时,通过生物信息学软件预测与冠心病相关miRNA(s)基因启动子区转录因子结合位点;然后进一步应用双萤光素酶实验进行验证其可靠性。结果:miRNA基因芯片初筛结果显示,与正常组相比,有4个miRNAs（miR-206、miR-302a-3p、miR-383、miR-574-5p）在冠

8、心病组中表达显著升高（P值均<0.01)且表达倍数均大于5倍。进一步运用qRT-PCR技术扩大样本量进行验证结果显示,miR-206和miR-574-5p在冠心病组中的表达水平与正常组相比仍存在显著差异(P值均<0.01);且ROC曲线表明这两个miRNAs对冠心病的诊断均有较好的敏感性和特异性。同时,生物信息学软件预测hsa-miR-206启