链置换等温扩增—电化学传感新技术联用检测mirna的方法学研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号？似！似淨硕ｉ学位论文链置换等温扩増－电化学传感新技术联用检测ｍｉＲＮＡ的方法学研究ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｍｉＲＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｓｔｒａｎｄｄｉｓｌａｃｅｍｅｎｔｏｌｍｅｒａｓｅＫａｃｔｉｏｎｃｏｕｌｅｄｗｉｔｈｐｐｙｐｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｉｎｇ化ｃｈｎｏｌｏｇｙ马耍导师姓名郑磊教授专业名称临床检验诊断学培养类型学术型论文提交日期２０１５年３月２０日

2、南方医科大学２０１２级硕ｉ学位论文－电化学传感新技术联用检测ｍ链置换等温扩增ｉＲＮＡ的方法学研究ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｍｉＲＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄ０打ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｓｔｒａｎｄｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔｐｏｌｙｍｅｒａ化Ｋａｃｔｉｏｎｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｅｎｓｉｎ化ｃｈｎｏｌｏｇｇｙ课题来源：国家自然科学基金（８１３７１９０１）教育部博壬点基金（２０１３４４３３１１００１０）ＡＡＣＣＣＰＯＣＴＲｅｓｅａｒｃｈｒａｎｔｇ学

3、位申请人马变导师接名郑磊教授专业為称临床检验诊断学培养类型学术型培养层次硕壬所在学院第一临床医学院答辩委貢会主席吴晓蔓教授答辩委员会委员温化荣教授刘新光教授白晓春教授蔡贞副教授２０１５年３月２０日广州硕壬学位论文链置换等温扩增－电化学传感新技术联用检测ｍｉＲＮＡ的方法学研究硕壬研究生：马委指导老脈郑磊教授摘要研究背巧微小核糖核酸ｃｒｏ一（ｍｉＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ）是近年来在真核生物中发现的类内－源性具有调控功能的单链非编码ＲＮＡ，其长度约为１９２５个核昔酸，主要发挥基因转录后水平调控作用一

4、系。目前已有研究证明，ｍｉＲＮＡ参与生命过程中的列重要活动，包括生长发育、免疫防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和调、肿瘤发展亡、脂肪代谢、也脏发生等。虽然目前对已发现的ｍｉＲＮＡ分子功能和作用辆基因的研究还处于初步阶段，但是从ｍｉＲＮＡ在不同组织和疾病的表达谱中分析发现，某些ｍｉＲＮＡ在特定疾病中具有明显的组织特异性。上研究均表明，ｍｉＲＮＡ在疾病发生发展过程中存在非常重要的作用。ｍｉＲＮＡ的发现是临一床分子生物学革命性的突破，其高度的特异性和稳定性决定了其作为种新的一疾病生物标志物的巨大潜力。因此，找到种适合的检测方法显得尤为重要。目前，检测ｍｉＲＮＡ的

5、常见方法包括巧迹杂交、基因芯片、原位杂交化及炎光定量ＰＣＲ。送些技术多需要复杂的步骤、昂贵的仪器Ｗ及较高的实验成本，在一－定程度上限制了其临床应用。若发展种适用于临床实验室的ｍｉＲＮＡ检测方一．法，应满足Ｗ下几点要求：具备敏感的检测能力，能定量检测出极低丰度的不同临床标本中的ｍｉＲＮＡ，二．具备良好的特异性，能区分出高度同源的ｍｉＲＮＡ；。检测过程相对简便，无需昂贵的设备和试剂近年新发展起来的核酸链置换等温扩增技术，无论是在实际操作还是仪器Ｉ中文摘要要求方面，它，都比目前常用技术更为简单方便摆脱了对精良设备的依赖，在临床基层和现场快速诊断中均显示

6、了良好的应用前景。链置换等温扩増反应是指某些具有链置换活性的ＤＮＡ聚合酶在延伸新链的过程中遇到下游ＤＮＡ絶可Ｗ继续延伸并同时将下游双链剥离而产生游离的单链，其不需要特异性识别位点而在ｍｉＲＮＡ传感器设计中得到广泛应用。然而，目前等温扩增多需要光学检测，此过程需要激发光源，且，可能会造成背景光的干扰巧光在外界环境易浑灭，一再者单的光学检测法本身灵敏度有限，并不适合临床特别是基层医院的广泛应用一。如何解决这些不足，成为等温扩増领域的个关键问题。生物传感器由于集高效一、灵敏、特异、小巧、经济等优点于身，目前也已成为生命科学领域的研究热点。与光学检测方法相比，电化学

7、传感技术具有易微型化、选择性好、背景值低、无巧光浑灭、成本低、样品消耗少、便于实现自动化等优点在核酸检测方面具有独特的优势，且有效弥补了光学检测法的不足。然而，由于中间没有，传统的电化学传感器多利用信号放大提高灵敏度一。涉及到扩增反应，多数方法并不能达到临床实际样本的检测要求如何进步一。提高灵敏度，成为电化学传感技术领域的个关键问题综上所述，链置换等温扩增反应能够对核酸进行数量扩增增加方法的灵敏