菌丝霉素在毕赤酵母中的分泌表达及其对大鼠肠道健康和免疫功能的影响

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4、，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＹａａｎＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅＰＲＣｈｉｎａ，，Ｊｕｎｅ２０１５，本研究受到公益巧行业（农化）科研专项（２０１４０３０４７）教育部霍英东基金（１４１０２７）资助特致谢意！论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证

5、书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：刀建Ｗ巧年（月／（曰关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定；学校有权保留，即并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阔，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可レッ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：巧巧年（月／曰建（导师签名站巧年６月《日／四川农业大学硕±学位论文

6、中文摘要饲料中添加抗生素可促进动物生长、提高饲料转化率、对某些疾病起预防和治疗作用，但抗生素的应用也带来了耐药性和残留等负面效应，因此其替代品的研发成为目前的研究热点。与传统抗生素相比，抗菌狀因其无耐药性且具有良好的抑菌效果而逐渐受到人们的关注。菌丝霉素（Ｐｉｅ）是２００５年Ｍｙｇｉｎｄ等人从腐生子囊菌分泌蛋白中筛选分离得到的首例真菌防御素，具有强烈的抗革兰氏阳性菌作用。但是由于从，天然菌株中分离菌丝霉素工艺复杂，且成本较高限制了其应用。为实现菌丝霉素的廉价生产，研究了重组表，本研究成功构建了可分泌表达Ｐ］ｅ的毕赤

7、酵母基因工程菌达产物的体外抑菌活性和稳定性；在此基础上初步评价其在动物试验中的应用效果。主要研究内容和结果如下：一试验：菌丝霉素多聚体基因在毕赤酵母中的表达，为提高Ｐ／ｅ基因的表达量，降低其表达产物对宿主的毒性本研究室在前期研究一中构建了Ｗｅ多聚体基因，并实现了在大肠杆菌中的表达。为进步提高重组Ｐｉｅ表达水平，本试验将尸ｋ多聚体基因克隆进入毕赤酵母分泌型表达载体ｐＰＩＣＺａＡ，转化一－３３ｅ在毕赤醇母Ｘ后得到株基因工程菌ＰＮ；１％甲醇诱导下，其表达产物Ｐｉｅ能够有效分泌至培养基中，重组菌丝霉素分子大小约为４１ｋＤａ；

8、在摇瓶中诱导，毕赤酵一母基因工程菌ＰＰｌｅ分泌水平达１４３／ｍＬ。该毕赤酵母工程菌的成功构建为进步评Ｍｇ估其抑菌