温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响.pdf

《温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第42卷第4期当代化工Vo1．42．NO．42013年4月ContemporaryChemicalIndustryApri]，2013温度对一甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响周洪波L，林福来，郑甲，郭宁，吴俊子，吴丽双，邱冠周L(1．中南大学资源加工与生物工程学院，湖南长沙410083；2．生物冶金教育部重点实验室，湖南长沙410083)摘要：B一甘露聚糖酶已经广泛的在毕赤酵母中异源表达，为了提高p一甘露聚糖酶在毕赤酵母中的产量，本文研究了培养温度对p一甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响。通过比较不同温度下p一甘露聚糖酶在转录和蛋白表达水平的差异，发现降低温度

2、虽然降低了mRNA表达量，但是外源蛋白得到积累增加；降低培养温度可以显著提高重组菌株的活性，从而减少细胞死亡带来的胞内蛋白酶的释放，最终使得低温下发酵液中的蛋白酶活力显著下降。研究结果表明降低培养温度能显著提高B一甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量。关键词：B一甘露聚糖酶；qPCR；mRNA表达；培养温度中图分类号：TQ925文献标识码：A文章编号：1671-0460(2013)04—0401—05EffectofCultureTemoeratureontheExpressionof[I-mannanaseinpichiapastorisZHOUHong-Bo，

3、LINFu—laiL，ZHENGJia1，GUONing，WUJun·Zf，WULi—shuang，UGuan-zhou(1．CentralSouthUniversity,HunanChangsha410083，China；2．KeylaboratoryofBiometallurgyofMinistryofEducation，HunanChangsha410083，China)Abstract：p—MannanasehasbeenextensivelyexpressedheterologouslyinPichiapastoris．Theefectofthec

4、ulturetemperatureontheexpressionof~-mannanaseinPichiapastoriswasinvestigatedinordertoimprovetheproductionof~-mannanaseinPichiapastoris．Throughcomparingthediferenceoftranscriptionandproteinexpressionlevelsof~-mannanaseunderdifferentculturetemperature，it’SfoundthatmRNAleveldecreasedw

5、ithdecreasingofthetemperature，butexogenousproteinwasaccumulated．Loweringculturetemperaturecouldevidentlyimprovethecellaviabilityoftherecombinantstrain，whichcouldreducethereleaseofintracellularproteasefromthedeathcell，ultimatelymaketheproteaseactivityinthefermentationbrothdecreasesi

6、gnificantlyunderthelowtemperaturecultivatecondition．Theresearchresultsshowthatloweringculturetemperaturecanevidentlyimprovetheexpressionof13-mannanaseinPichiapastoris．Keywords：[3-mannanase；QPCR；Pichiapastoris；CulturetemperatureB一1,4一D一甘露聚糖酶endo一1，4一D—mannanase，在毕赤酵母中获得了成功表达，摇瓶发酵24h

7、，发EC3．2．1．78)能够随机催化水解甘露聚糖、半乳甘露酵上清液酶活可以达到343U·mL～，产酶蛋白量约聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖等中的B一1,4一为1．0mg·mL～。甘露糖苷键，属于半纤维素酶类n，它有着许多广蛋白的降解是高密度发酵培养的—个主要问题卅。泛的应用前景，例如纸浆漂白，降低咖啡提取物的许多报道表明通过降低温度可以有效减少外源重组粘度，提高饲料的营养价值和用于石油开采等‘。蛋白的降解，温度控制策略能有效防止外源蛋白的随着B一甘露聚糖酶的应用越来越广泛，其需求量降解。。温度对毕赤酵母的影响主要是影响酵母细也越来越大，为了提高B一甘露聚

8、糖酶的产量，目胞的生长速率，温度过低抑制生长，毕赤酵