羧基键合固定相的合成及其对丹参酮的分离研究

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1、江南大学硕士学位论文羧基键合固定相的合成及其对丹参酮的分离研究姓名：李莉霞申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：彭奇均20060601摘要丹参为唇形科鼠尾草属植物，具有广泛和较高价值的药理活性。丹参浸膏是丹参经乙醇提取的脂溶性成分，主要有隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA三种。工业上主要是以硅胶为固定相通过杜层析来分离月参酮的，但是由于硅胶中硅羟基的存在会对丹参酮产生不可逆吸附，其经硅胶柱层析后一般会有大约50％的损失，从而造成其收率大大减小。本文通过制备羧基键合硅胶固定相，并对此固定相进行色谱性能分析和制各柱初步研究来考察其对丹参酮的分离效果和不可逆吸附量。通过对丹参浸

2、膏HPLC法成分分析方法的探讨，得到丹参浸膏中隐月参酮含量为3．33％，丹参酮I含量为3．19％，丹参酮IIA含量为17．40％；并且其重现性好，准确度和精密度较高，丹参浸膏样品溶液10℃时至少在48h内稳定。通过两步反应在硅胶表面键合上含有羧基的链段。首先通过正交实验探讨了制备工艺条件对羧基键合固定相键合量及丹参酮IIA和月参酮1分离度的影响。结果显示各因素对羧基键合固定相键合量的影响显著程度为：甲苯用量>己二酸用量>反应时间>反应温度；对月参酮IIA和丹参酮I的分离度的影响显著程度为：甲苯用量>己二酸用量>反应时间>反应温度。因此选择的最佳工艺条件组合为己二酸／硅胶(W

3、／W)为1，甲苯，硅胶(mUg)为5，反应温度为1104C，反应时间为12h。根据热重分析可以确定硅胶键合相在160。C以下化学性能基本稳定。根据稳定性分析说明羧基键合固定相在水中不稳定。其次对此羧基键合固定相进行色谱性能测试，在流动相为石油醚(60—90℃)一乙酸乙酯(85：15)，流速为O．5mL／min，检测波长为260nm，杠温为30℃，进样量为20pL的色谱条件下，研究考察了键合量和溶剂极性对丹参酮lI和月参酮1分离度及丹参酮II的峰面积的影响。结果显示羧基键合固定相的键合量增大，则丹参酮IIA和丹参酮I的分离度提高，当羧基键合固定相的键合量为14．73pmol／

4、m2时，丹参酮IIA和月参酮I的分离度为1．36，比其在硅胶上的分离度0．91明显提高；丹参酮IIA的峰面积也随之增大，当羧基键合固定相的键合量为14．739mol／m2时，丹参酮IIA的峰面积比其在硅胶柱上的峰面积增大约37％，说明羧基键合固定相不可逆吸附量随键合量的增大而减小。对不同体积配比的石油醚(60--90‘C)一乙酸乙酯二元体系，随着混合溶剂介电常数的增大，丹参酮IIA和月参酮I的分离度有减小的趋势，当介电常数由2．09增大到2．74时，丹参酮IIA和月参酮I的分离度则从1．36降低到1．2l；月参酮IIA的峰面积则随混合溶剂介电常数的增大有增大的趋势，当介电常

5、数由2．09增大到2．74时，丹参酮IIA的峰面积增大了约16．25％，即随着混合溶剂介电常数的增大，丹参酮IIA的不可逆吸附量有减小的趋势，其收率不断增大。最后在硅胶与硅胶键合固定相制备色谱柱上分别观察丹参酮的分离及其收率情况；比较硅胶键合固定相对月参酮分离效果及不可逆吸附的改善情况。柱层析分离采用干法装柱，拌样时样品／固定相一1：l，装柱时拌样固定相：新固定相ml：lO：先使用石油醚(60--90"C)洗脱，再用石油醚(60--90"(2)一乙酸乙酯(85：15)洗脱；流速采用1．0mL／min。结果显示经硅胶柱层析分离后丹参酮IIA的纯度达到91．3％，经羧基键合固定

6、相柱层析分离后丹参酮IIA的纯度达到了93．6％，并且羧基键合固定相对丹参酮的不可逆吸附量明显减少。丹参酮IIA的收率提高35．3％，丹参酮I的收率提高34．3％，隐丹参酮的收率提高34．6％；丹参酮IIA的纯度提高了2．3％，丹参酮I的纯度提高了2．4％，隐丹参酮的纯度提高了0．2％。说明使用羧基键合固定相分离丹参酮以提高其产率在工业制备中是可行的。关键词：丹参酮高效液相色谱羧基键合固定相不可逆吸附量IIABSTRACTTheSalviamiltiorrhizaBge．iStheChinesetraditionalmedicinefortheLabiatae．Ithas1

7、lighvalueinpharmacologyactivenessandisinwideuse．n圮fat-solubleingredientsareextractedfromitbyethylalcohol，inwhichmainlyareCryptotanshinone，TanshinoneIandTaushinoneIIA．Intheindustry,thetraditionalseparationofTanshinonesmainlyusessilicagelcolumnchromatography．But