膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究

《膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10264研究生学号：M100101099上海海洋大学硕士学位论文题目：膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究Studyonthephysiologicalfunctionofmembraneprogestin英文题目：receptorinthereproductivecycleofflatfish专业：水产养殖研究方向：鱼类生殖内分泌学姓名：李晓晓指导教师：柳学周二O一三年四月十日膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人

2、在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位

3、论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文膜孕激素受体在鲆鲽类繁殖周期中的生理功能研究摘要本研究以工厂化养殖的半滑舌鳎和牙鲆为研究对象，运用组织学切片、电镜观察、同源克隆和cDNA末端快速扩增、荧光实时定量、放射免疫测定等方法，对亲鱼卵巢的周期发育情况、卵母细胞的发育特点、膜孕激素受体和新型膜孕激素受体基因的cDNA全长克隆和时空表达特征、性类固醇激素在繁殖周期和全年中的变化规律等进行了研究。初步了解卵巢和卵母细胞不同发育阶段的结构特征、性类固醇激素生理作用、两种膜孕激素受体基因的生理功能，为提高鲆鲽类的人工繁殖技术提供了理论依据。相关

4、的研究结果如下：1.运用组织学方法和透射电镜观察方法，对性成熟半滑舌鳎卵巢和采集到的卵母细胞发育特征进行观察，发现卵巢发育可分为5个期，卵母细胞的生长发育过程可分为5个时相。初步判断：200-500um卵母细胞为Ⅲ时相卵母细胞，500-800um卵母细胞为Ⅳ时相卵母细胞，800-1000um卵母细胞为Ⅴ时相卵母细胞，1000-1200um卵母细胞为游离在卵巢腔中的卵母细胞。在200-300um卵母细胞的滤泡细胞外层能看见毛细血管，并且在滤泡细胞外包被着一层表面上皮，在胞质中分布着大量的线粒体；在300-400um卵母细胞中发现了皮质液泡、粗面内质网、高尔基体和溶酶体等细胞器；在400-50

5、0um卵母细胞中发现卵黄颗粒，卵膜附近出现高电子密度的物质；在500-600卵母细胞中I上海海洋大学硕士学位论文致密的卵黄颗粒上有透明的平行条纹，并且卵黄颗粒之间有大量的线粒体聚集；在600-700um卵母细胞中发现孔道明显变短、数量减少；在700-800um卵母细胞中发现卵黄颗粒附近有比较发达的粗面内质网；在800-900um卵母细胞中发现胞质中充满卵黄颗粒，并且卵黄颗粒有相互融合的现象。2.采用同源克隆和末端快速扩增方法，首次从半滑舌鳎卵巢中克隆了膜孕激素受体α（mPRα）的cDNA序列，全长为1319bp；将推断的氨基酸序列与其它物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析，发现存在7个跨

6、膜区域。聚类分析和序列相似度分析表明：半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支，亲缘关系较近，相似度较高，分别为94%、93%和90%；而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%，亲缘关系较远。采用荧光实时定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达，结果表明：mPRα组织表达具有广泛性，但表达量存在差异，在脑、卵巢和垂体等组织中表达丰富，而在肝脏、肌肉、胃、肠和肾脏等组织中表达较弱。对繁殖周期中，脑、垂体和卵巢的mPRα表达水平的变化进行分析，结果显示：mPRα的周期表达水平，在脑和垂体组织中，当卵巢发育至Ⅳ期时表达量最高；

7、在卵巢组织中，mPRα的周期表达水平在卵巢发育至Ⅴ期时表达量最高。3.采用同源克隆和末端快速扩增方法，首次从半滑舌鳎卵巢中克隆得到新型膜孕激素受体（mPRL）的cDNA序列，全长为2002bp。构建II上海海洋大学硕士学位论文了14个物种的mPR家族成员氨基酸序列系统进化树，包括硬骨鱼类和哺乳类，发现此进化树共分为3大分支，分别为mPRα分支、mPRL分支、mPRβ分支，半滑舌鳎mPRL基因属于硬骨鱼类mPR家族新基因分