鲆鲽类dead box rna解旋酶家族基因的研究

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1、》＾义考變）寸料ＯＣ：ＥＡＮＵＮＡＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮ博壬学位论文ＤＯＣＴＯＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ鲜錢类ＤＥＡＤｂｏｘＲＮＡ解旋酶家族基因论文题目：的研究ＳｔｕｄｙｏｆＤＥＡＤｂｏｘＲＮＡｈｅｌｉｃａｓｅｆａｍｉｌｉｎｔｗｏｙ？英文题目；ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｆｌａｔｆｉｓｈＰｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ（）作者：王忠凯指导教师：张全启教授学位类别：学术学位专业名称：海洋生物学研究方向：

2、海洋生物技术——＊？，ｆＩｆ，－、Ｉｇｒｒｏ谨｜＾（此论文献给我敬爱的导师父母、爱人和，亲爱的支持我的朋友们王忠ｍ鲜鐵类ｄｅａｄｂｏｘＲＮＡ解旋酶家族基因的研究学位论文答辩日期：指导教师签字；－答辩委员会成员签字：知苗葦＾４／４＾—徽．４＾独询巧明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含未获得

3、（注：如巧有其化需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学化或证书巧用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名字曰期年／月／日学位论文巧较使用授巧书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：］、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁益，允许论文被查阅和借阅。２、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ＂采用影印、缩印或扫描等复制手段保

4、存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（巧密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名＾签字曰期年／月曰．签字曰期％＾口／ｒ年／月曰兴Ｉ？化（巧錢类ＤＥＡＤｂｏｘＲＮＡ解旋巧家族基因的研究搞要１半滑舌基因的克巧、表达分析及标巧载体的巧珪本研巧Ｗ实验室己有的半滑舌錫转录组文库为基础，通过ＲＡＣＥ，染色体步移等方法

5、克隆得到半滑舌錫ｖｏｓｆｌ基因的ｍＲＮＡ全长序列，基因全长序列，启动’Ａ－子区序列化及３侧異区序列３种ｍＲＮ，ＶＷ／，。发现基因转录时产生分别为ＶＯ－－－ＳＷ和ｖｏｓｓｏｖｏｓｆｌ基因包含別个外湿子，其中外显子４的可变剪切产生ＷＷ／，－Ｗ而外显子１０的可变剪切产生ＶＣＷ。对半滑舌錫基因的蛋白质结构及系统ＶＡＳＡ亚一发生分析均表明该基因是ＤＥＡＤｂｏｘ解旋酶家族中的家族的成员之。实时巧光定量ＰＣＲ证实了在性腺组织的特异性表达，其中的相对表达量占决定地位。组织原位杂交实验显示ＶＷｆ

6、ｌ在性腺姐织中只在铸原细胞、精母细胞一步证明了、卵原细胞和巧母细胞中表达，在体细胞和精子中不表达，进ＶＷＯ在生殖系细胞的特异表达，因此可Ｗ用其启动子来构建生殖系特异表达的标记载体。此外，通过焚光定量ＰＣＲ，在半滑舌錫幼鱼的性腺分化时期只检测到ＶｆｌＳ－Ｓ－了的表达，尤其是在原始生殖细胞进入有丝分裂的关键时期，ｗｊｓ在雌雄－鱼中的相对表达量呈相反的变化趋势，。之后在ｐＥＧＦＰＣｌ载体的基础上，我们对其进行改造，首先在绿色巧光蛋白的Ｎ端的多克隆位点处利用双巧切的方法’’插入了＾

7、？＾７基因的３侧莫区（包括３１］７１〇，其次把载体上原本的人巨懂细胞病’－ｓＰｖＥＧＦＰ－毒的后动子ＰｃＭｖ替换成基因的启动子Ｐｖａ，最终构建成ａｓ３ｆｌａｎｋ载体。这项研巧有助于我们标记半滑舌巧的ＰＧＣｓ，追踪ＰＧＣｓ的发生、形成，及迁移过程，可Ｗ有助于我们更深入的了解半滑舌巧性腺的发育、成熟过程从而巧得更加有效的生殖调控手段，促进半滑舌巧的选择育种技术的发展，并为今＂＂后进行种质资源的保存Ｗ及开展巧煤类的借巧生子等研巧提供了理论基础和方法工具。２牙＃公奴Ｊ基因的进化巧巧

8、在本研巧中我们首先通过巧列比对从实验室己有的牙巧基因组和转录组文库中得到两个牙鲜的Ｏ＆ｊ基因。其次，我们继续通过序列比对从ＮＣＢＩ和ＥｎｓｅｍｂＩ基因组数据库中找到其它脊椎动物的基因，发现在除了雀轄的硬骨鱼中都有两个０油Ｊ基因，真兽亚纲动物也有〇戒如＾和０办３＾基因，而在其一它的脊椎动物中只有个０＆３基因。通过系统发生分析，基因巧线性分析和染色体巧线性分析，我们比较了真兽亚纲仿基因与硬骨鱼类的两个公办ｊ基