环杷明诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的实验研究

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1、上海交通大学医学院2010级硕士生毕业论文上海交通大学硕士学位论文论文题目环杷明诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的实验研究学科专业口腔临床医学作者姓名欧学平指导教师宋萌教授答辩日期2013年05月1万方数据上海交通大学医学院2010级硕士生毕业论文环杷明诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的实验研究Cyclopamineinducesapoptosisinhumansalivarypleomorphicadenomacells作者：欧学平指导老师：宋萌教授专业：口腔颌面外科学号：1107249500研究方向：涎腺多形性腺瘤局部浸润机制的研究申请学位级别：硕

2、士论文提交日期：2013年5月培养单位：上海交通大学附属第一人民医院资助基金项目：上海市科委重点资助项目（08JC1412900）上海市重点学科建设资助项目（S30206）II万方数据万方数据万方数据上海交通大学医学院2010级硕士生毕业论文环杷明诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的实验研究摘要研究目的：环杷明(cyclopamine)作用于人腮腺多形性腺瘤（humansalivarypleomorphicadenoma，HSPA）细胞后，探讨其对该细胞凋亡作用的影响，了解细胞凋亡形态的改变，研究其对细胞Gli-2和Bcl-2mRNA表达的影响及细胞

3、凋亡率的变化。研究方法：将人腮腺多形性腺瘤细胞分成三组，分别是空白对照组、DMSO对照组和实验组（环杷明组）。(1)分别用0.08%DMSO和10µmol/Lcyclopamine处理人腮腺多形性腺瘤细胞48h，于倒置显微镜下观察三组细胞数量及其形态的改变；(2)分别用0.08%DMSO和用10µmol/Lcyclopamine处理人腮腺多形性腺瘤细胞48h，Real-timePCR检测空白对照组、DMSO对照组和实验组（环杷明组）Gli-2、Bcl-2mRNA表达水平的差异；(3)分别用0.08%DMSO和用10µmol/Lcyclopami

4、ne处理人腮腺多形性腺瘤细胞24h，流式细胞术观察空白对照组、DMSO对照组和实验组（环杷明组）细胞凋亡率的变化。实验结果：(1)用10µmol/Lcyclopamine作用于人腮腺多形性腺瘤细胞48h后,倒置显微镜下可见细胞数量明显减少，细胞核碎裂或固缩、细胞核仁变形等典型的细胞凋亡形态变化；(2)Real-timePCR结果显示：环杷明组（实验组）与空白对照组、DMSO对照组相比，环杷明组可以显著下调Gli-2和Bcl-2mRNA的表达，其差异具有统计学意1万方数据上海交通大学医学院2010级硕士生毕业论文义（P<0.01），空白对照组与D

5、MSO对照组的Gli-2及Bcl-2mRNA的表达无明显差异，其结果没有统计学意义（P>0.05）；(3)流式细胞术结果显示：环杷明组的细胞凋亡率显著高于空白对照组和DMSO对照组，其结果具有统计学意义（P<0.01）。空白对照组和DMSO对照组的细胞凋亡率无明显差异，其结果没有统计学意义（P>0.05）。实验结论：本次实验从形态学方面、mRNA方面以及细胞凋亡率方面检测到了人腮腺多形性腺瘤细胞的凋亡，证实该细胞的凋亡活动与环杷明密切相关。其作用机制可能是：环杷明作用于人腮腺多形性腺瘤细胞后下调了细胞Gli-2mRNA的表达，从而引起Bcl-2

6、mRNA表达的降低，活化细胞凋亡的线粒体途径，引起细胞的凋亡。关键词：腮腺多形性腺瘤细胞，Gli-2基因，Bcl-2基因，细胞凋亡，环杷明2万方数据上海交通大学医学院2010级硕士生毕业论文CyclopamineinducesapoptosisinhumansalivarypleomorphicadenomacellsABSTRACTObjective:Thepurposeofthisstudywastoexaminewhethercyclopamineisrelatedtoapoptosisofhumansalivarypleomorphic

7、adenoma(HSPA)cells.CyclopamineeffectontheHSPAcells,morphologicalchangesofapoptosiswasobservedunderaninvertmicroscope,Gli-2andBcl-2mRNAexpressionchangesandtheapoptosisratechangesofthecellswasdetected,Methods:HSPAcellsweredividedintothreegroups,namelyblankcontrolgroup,DMSOcont

8、rolgroupandtheexperimentalgroup(thecyclopaminegroup).(1)Respectivelywith0.0