羽扇豆怀特酮的抗炎活性评价与机制研究

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1、学号：12112103常州大学硕士学位论文羽扇豆怀特酮的抗炎活性评价与机制研究研究生杨萌胡昆指导教师任杰学科、专业名称生物化工研究方向药理学2015年3月Activityevaluationandmechanismresearchonanti-inflammatorypathwaysofLupiwighteoneADissertationSubmittedtoChangzhouUniversityByYangMengBiologicalChemicalDissertationSupervisor:Prof.HuKunRenJieMarch，201

2、5中文摘要异黄酮类物质最先由植物中提取出来，由于与雌激素结构类似，因此可以参与机体的代谢，是一种天然化学药物。目前经研究证实了异黄酮类物质具有抗炎方面的活性。市面上使用的临床抗炎药大多属于类固醇和环氧酶抑制剂，但是这类药物对胃肠道和肾脏存在一定的毒性反应。因此，寻找天然化合物或修饰的天然化合物成为了新的抗炎药物发展方向。羽扇豆怀特酮是一种来自于白羽扇豆的异黄酮类物质，其抗炎活性及作用机制尚没有文献报道。在本课题中，该化合物的抗炎活性及在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用机制得到初步研究，并在小鼠炎症模型中进行验证。本课题使用脂多糖刺激小鼠巨噬细

3、胞RAW264.7构建炎症细胞模型，以MTT检测羽扇豆怀特酮的毒性，首先用ELISA和GriessKit分别检测炎症状态下细胞产生的TNF-α和NO，初步鉴定其抗炎活性；其次，进一步的用PCR检测其对炎症因子COX-2，iNOS，TNF-α，IL-1β和IL-6mRNA的抑制作用；再次，以westernblot、免疫荧光来探究羽扇豆怀特酮对巨噬细胞RAW264.7细胞中的NF-κB和MAPKs炎症应激通路调节；最后，以westernblot、免疫荧光和转染来探究羽扇豆怀特酮对Nrf2及其与ARE和下游HO-1的调节，从而初步阐明了羽扇豆怀特酮通过

4、抑制了NF-κB和MAPKs通路而减缓炎症，同时促进Nrf2来增强抗炎能力，并且在小鼠炎症肿胀模型中也表现出了消肿抗炎的效果。结果发现：(1)羽扇豆怀特酮可以明显抑制脂多糖诱导的炎症因子表达，对NO的半数抑制浓度为7.7μM，对TNF-α的抑制率为36.1%；(2)羽扇豆怀特酮通过抑制NF-κB上游的IκBα的磷酸化从而抑制了NF-κB的核转移；(3)在脂多糖激活的MAPKs通路中，羽扇豆怀特酮对ERK和JNK抑制程度较强，并对其抑制表现出时间依赖性；(4)羽扇豆怀特酮促进了Nrf2的核转移，并且增强了ARE的表达继而使下游的HO-1表达增加；(

5、5)HO-1抑制剂的加入促进了炎症因子的释放，经羽扇豆怀特酮处理后其炎症因子再次被抑制，进一步证实了其对HO-1的促进作用；(6)动物实验表明羽扇豆怀特酮抑制了炎症引起的肿胀，给药剂量为20mg/kg情况下，1h和2h后的肿胀抑制率分别为26.42%和11.88%。通过以上研究，我们发现了羽扇豆怀特酮可以抑制以NF-κB和MAPKs为主的炎症促进通路，同时增强了Nrf2为主的细胞保护因子，I初步探讨了羽扇豆怀特酮的抗炎通路研究，为人们进一步了解异黄酮物质的抗炎活性提供依据。关键词:羽扇豆怀特酮；炎症；NF-κB；MAPKs；Nrf2IIABSTR

6、ACTIsoflavoneswerefirstlydeprivedfromplants.Similartoestrogen,isoflavonescouldparticipateinthemetabolicprogressanddisplacetheexecutionbehaviorofestrogen,thusservedasnaturalchemicaldrugs.Presentstudiesconfirmedisoflavonesexhibitedanti-inflammatoryactivities.Steroidsandepoxyenz

7、ymeinhibitorsarethemostwidelyusedininflammationtreatment,butsideeffectsofgastrointestinaltractdamageandkidneytoxicityareundesirable.Thereforemanyinvestigatorsfocusonnaturalresourcesormodulatedcompoundtoachievetenderdrugs.Lupiwighteone(Lup)belongstoisoflavonepurifiedfromwhitel

8、upineandrarelyreportedinthestudyofpharmacologyincellswithanti-inflam