人β-防御素2联合乙肝疫苗免疫balbc小鼠的免疫效果评价

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：髻伍乏签字日期：2口纱年／月纩日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，

2、允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：髻欠i导师签名(手写)：弼眨签字日期：勘侈年‘月莎日签字日期：沙!；年易月7日摘要JllllPJllllXllllm

3、lllllllllJllrJlllPJllllrllllY2427152目的：研究人D．防御素2促进树突状细胞成熟的作用及其对乙肝疫苗免疫BALB／c小鼠免疫功能的影响。方法：1．用重组小鼠IL．．4(10ng／mL)、GM．-CSF(20ng／mL)诱导小鼠骨髓细分化培养胞6天，通过倒置显微镜观察细胞集落形成，同时用流式细胞仪检测细胞表面分子(CDllc、MHCII、CD80、CD86)。2．用浓度分别为0n∥mL、12．5n∥mL、25ng／mL、50ng／mL、100n∥mL的HBD2刺激培养BMDCs24h

4、，通过qRT-PCR检测IL．6、IL．12p40mRNA表达，通过流式细胞仪检测MHCII、CDllC、CD80、CD86阳性细胞百分率。3．将小鼠随机分2组：分别在大腿内侧肌注射PBS200uL／只和HBD2300ng／D，并分别在注射后第4h、8h、12h眼眶采血和无菌条件下摘取脾脏。ELISA检测血清IL．12p70、IFN吖含量，并采用qRT-PCR检测脾组织IL-6、IL-12p40、IFN吖mRNA表达。4．将40只4-6周龄雌性BALB／c小鼠随机均分为4组，前3组分别于大腿内侧肌肉注射PBS200

5、uL、乙肝疫苗3ug和HBD2300ng，第4组(联合免疫组)于同一部位注射300ngHBD2后4h后在同一部位再注射3ug乙肝疫苗。接种程序均为0、14、28天共3次。5．ELISA检测第一次免疫注射后第1l天、22天、33天、42天小鼠血清HBsAbS／C．O值，并在第42天处死小鼠后收集血清检测IL．2OD值、IFN吖和IL．12p70浓度和体外培养上清IFN吖含量；通过称量小鼠体重和脾重，计算脾指数；用qRT-PCR检测脾细胞IL．2、IFN吖和IL．12p40mRNA表达；以及流式检测脾细胞CD3+CD4

6、+、CD3+CD8+T细胞百分率及比值。结果：1．倒置显微镜观察发现在重组小鼠IL．4和GM．CSF作用下，培养第1天可见大量圆形细胞密集生长；第2天可见大量点状细胞集落，第3天见呈簇状生长的细胞集落；第5天较多细胞呈半悬浮生长，并可见大量集落；第6天可见摘要大量细胞从集落脱离，呈悬浮生长，细胞体积进一步增大，周边可见明显刺状突起，胞核易见。收集培养第6天的细胞，经流式细胞仪检测结果表明，细胞表面表达CDllc(92．2％)，表达CD80(80．1％)、CD86(37．2％)和MHCII(41．5％)，表明提取出纯

7、度较高但处于未成熟的DC。2．流式细胞仪检测不同浓度HBD2作用下的BMDCs发现，未加HBD2的BMDCs的CDllc+(84．82％)、MHCII+(60．67％)、CD80+(84．65％)和CD86+(55．85％)表达均相对较低，而加有不同浓度HBD2刺激的BMDCs中，以50ng／mL为最适刺激浓度，其BMDCsCDllc+(91．32％)、MHCII+(73．75％)、CD80+(92．65％)和CD86+(73．81％)细胞百分率最高，两组比较MHCII+、CD86+细胞百分率差异有统计学意义俨<0

8、．05)。qRT-PCR检测发现IL．6基因相对表达水平在HBD2为100ng／mL时最高(3．16+0．1)，与未加HBD2组比较差异有统计学意义(P