大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征

《大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文论文题目大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征研究生姓名彭巍指导教师姓名吴永友副教授专业名称外科学研究方向胃肠外科论文提交日期2013年10月本课题得到：国家自然科学基金资助项目：（81172348）资助；江苏省教育厅研究生科研创新计划资助项目：（CXZZ11_0122）资助；江苏省医学重点人才项目及苏州市科技发展计划资助项目：（SYS201031）资助。大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征中文摘要大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征中文摘要目的：比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞（CCAFs）的不同原代培养方

2、法，筛选最佳培养条件。探索CCAFs不同于正常成纤维细胞的糖代谢特征。方法：高浓度双抗低温处理大肠癌标本；12d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率；利用6d贴壁率及12d爬出细胞数法比较不同组织块大小33（1mm，8mm）、培养基种类（1640，DMEM，F12）、培养瓶材质（玻璃瓶，塑料瓶）与血清浓度（10%，20%）的培养效率；所获CAFFs行免疫荧光鉴定并绘制生18长曲线；从免疫组化、免疫荧光、F-FDG摄入率、乳酸测定、westernblot等方面比较出CCAFs的糖酵解特征并测定肿瘤细胞对CCAFs的糖酵解

3、特征的影响。结果以SPSS18.0软件进行统计分析。结果：1.组织块植入法与酶消化法原代培养的12d细胞计数分别为9.75±0.91×4410与1.83±1.22×10（t=13.733，p=0.000）；12d细胞计数法提示高血清浓度（t=-3.549,P=0.0055），较大组织块（t=-1.115，P=0.01）可增加细胞培养效率；与F12与DMEM比较，1640培养基具有更高细胞培养效率和性价比，其回归方程为：Y=10.68750-3.96528X22-2.00694X3+1.03472X4；培养瓶材质不影响细胞数量（t=-0.1

4、16，P=0.910）；6d细胞爬出率与培养瓶和培养基有关，回归方程为Y=0.81367+0.20478X1-0.33312X2；2.原代培养的CCAFs特异性表达SMA-α及MCT4，18肿瘤细胞则表达MCT1，CCAFs以及肿瘤细胞诱导的CCAFs均表现为高F-FDG摄入和高乳酸排出，且在生长方面明显快于CNFs。结论：高浓度双抗低温处理组织标本，以含高浓度胎牛血清的1640培养基，采用大组织块植入法是CCAFs原代培养的优化方法，获得的CCAFs具有典型CAFs特征。肿瘤细胞诱导成纤维细胞活化，增加CCAFs的葡萄糖摄取与糖酵解能力

5、，并释放酸性的、富含能量的乳酸进入细胞间质，为肿瘤细胞的增殖、转移提供能量并营造I中文摘要大肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其糖代谢特征适于肿瘤细胞生长的酸性环境。关键词：大肠癌相关肿瘤成纤维细胞；原代培养；MCT1；MCT4；糖酵解作者：彭巍指导老师：吴永友副教授IIPrimarycultureofhumancolorectalcarcinomaassociatedfibroblastsandtheirmetaboliccharacteristicsAbstractPrimarycultureofhumancolorectalcarcin

6、omaassociatedfibroblastsandtheirmetaboliccharacteristicsAbstractObjective：Toscreenandoptimizetheconditionsfortheprimarycultureofcolorectalcarcinomaassociatedfibroblasts(CCAFs)andtoexploretheirmetaboliccharacteristicssoastosearchforpotentialtargetforthetreatmentofcolorecta

7、lcancer.Methods：1.Freshspecimensfromrectalcarcinomawerepretreatedwithhighconcentrationantibioticsinlowtemperature.2.Thecollagenasedigestionmethodandtissueexplantationmethodwerecomparedwith12-daycellcounts.3.Theeffectsofdifferentcultureconditionson6-dayemigrationratiosand1

8、2-daycellcountswereinvestigatedtooptimizetheculturesurface，medium，FBSlevelsandblocksizeinprimary