人毛囊体外保存的实验研究

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1、硕士学位论文学校代码：10023学号：$2010004002人毛囊体外保存的实验研究Astudyofinvitropreservationofhumanhairfollicle所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：整形外科医院管乐曹谊林教授肖苒尹宏宇严笠外科学毛囊的体外保存2013年5月目录中文摘要·························································1英文摘要·························································2前言·············

2、················································4日Ⅱ舌。‘。‘。‘‘‘‘。‘‘‘‘。‘。。。。。。‘。。。‘。。。。。。。。。。。。。‘。‘‘。。。‘。。。。。。。。。。。。。4第一章优化玻璃化冷冻保护剂体外冻存人毛囊的实验研究·············6第一节人完整毛囊的体外培养··································6第二节玻璃化冻存和慢速冻存法体外保存人毛囊·················14第三节优化玻璃化冷冻保护剂冻存人毛囊·······················22第二章利用组织工程皮肤体外

3、保存人毛囊的实验研究················30第一节组织工程皮肤的体外构建·······························30第二节应用组织工程皮肤体外保存毛囊·························36全文总结························································44论文参考文献····················································45综述······················································

4、······50综述参考文献····················································54英文缩略词表····················································59致谢····························································60近年发表文章及科研情况··········································61独创性声明·············································

5、·········62中文摘要研究背景：毛囊的体外保存对于临床毛发移植具有重要意义，很多学者利用低温以及玻璃化深低温冻存等各种不同方法体外保存人完整毛囊，但效果均不理想，研发更有效的玻璃化冷冻保护剂是解决问题的关键。另外，毛囊再生与皮肤微环境具有复杂而密切的联系，组织工程皮肤在一定程度上模拟了毛囊生长环境，本研究首次尝试利用组织工程技术在体外常温保存毛囊。目的：1．添加促进毛囊再生的相关生长因子，优化玻璃化冷冻保护剂。2．组织工程技术模拟毛囊的生长环境，探讨常温保存毛囊方法。方法：1．将临床取得的健康头皮分离为单个无损伤毛囊后，随机分为体外培养组、慢速冻存组、玻璃化冻存组和细胞因子玻璃化

6、冻存组。分别冻存24小时，72小时，1个月，6个月。通过长度测量、HE染色和免疫荧光染色检测毛囊活性。2．将分离的毛囊单位插入由成纤维细胞和I型鼠尾胶原构建的组织工程真皮后，分3次铺入角质形成细胞，浸没培养1周、气一液界面培养3周后，通过镜下观察、HE染色和免疫组化检测组织工程皮肤和毛囊的生长状态。结果：1．经过不同时间冻存后复温，细胞因子HGF玻璃化冻存组毛囊5天内生长率和生长长度高于其他冻存组，与体外培养组无统计学差异；HE染色结果显示该组毛囊细胞数量多于其他冻存组，且组织结构更完整；免疫荧光染色显示该组毛囊的干细胞存活数量明显多于慢速冻存组和未加因子玻璃化冻存组。2．经过4周体外培

7、养，植入毛囊的组织工程皮肤镜下观察可见毛囊和皮脂腺等皮肤附属器存在，毛囊形态维持21天未见毛乳头损坏，该时间明显长于体外悬浮培养。HE染色显示植入毛囊的组织工程皮肤表面可见分层角化的表皮形成，免疫组化染色显示其分化标志物Keratin4和Keratin10表达阳性，表皮真皮连接处基底膜特异性标志物Laminin和IV型胶原呈连续表达。结论：加入细胞因子HGF优化玻璃化冷冻保护剂的玻璃化冻存技术可长期有效保存毛囊。复合毛囊单位的组织工