应用猪口腔液进行prrsv中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评估

《应用猪口腔液进行prrsv中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评估》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博博士学位士论文欧阳应用猪口腔液进行PRRSV中和抗体监测康及纳米颗粒候选疫苗的评估应用猪口腔液进行PRRSV欧阳康中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评估二○一三年十二月2013分类号S855密级UDC博士学位论文应用猪口腔液进行PRRSV中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评估欧阳康学科专业预防兽医学指导教师吴健敏研究员Dr.GourapuraJ.Renukaradhya论文答辩日期2013年12月1日学位授予日期答辩委员会主席黄仁彬教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特

2、别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保

3、密，在年解密后适用授权。□不保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：日期：指导教师签名：日期作者联系电话：电子邮箱：应用猪口腔液进行PRRSV中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评价摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自1991年被鉴定以来，已经成为严重危害养猪业的主要疫病，目前在世界范围内每年都给养猪业造成上亿经济损失。口腔液是一种唾液和黏膜渗出液的混合物，包含来自血清和唾液腺的抗体。由于采集简单、费用低廉，用口腔液进行猪场疫病监测得到越来越多的应用。PRRSV特异性中和抗体在病毒的清除中发挥着重要作用，同时也是评估猪群PRRS免疫保

4、护水平的主要指标。有研究证明可以从猪口腔液样品中检测到PRRSV病原和病毒特异性抗体。但是，迄今为止，应用猪口腔液来检测PRRSV中和抗体仍是空白。因此，本研究旨在建立一种应用猪口腔液进行PRRSV特异性中和抗体检测的试验方法。首先进行标准化试验，口腔液样品主要来自两个方面：猪场免疫PRRSV弱毒疫苗(PRRSV-MLV)后为期三个月间断性采集的口腔液样品；公猪免疫PRRSV-MLV或感染PRRSV-MN184当天及第21天采集的口腔液和血清样品。试验结果发现当口腔液中PRRSV中和抗体滴度大于1:8时是病毒特异的，而这种特异性中和抗体只有在免疫

5、或者感染28天后才能从口腔液中检测到。为了验证该试验方法，从一个背景未知的猪场，采集了以栏为单位的口腔液样品共104份以及每栏有代表性的血清样品5份；另外，从4个不同育种猪场中，采I集重复免疫的母猪血清样品以及对应母猪产下仔猪的口腔液样品各100份。检测结果显示，口腔液中的PRRSV中和抗体滴度与血清中和抗体滴度相关，可以从断奶后仔猪的口腔液样品中检测到PRRSV特异性母源中和抗体。当前现有的PRRSV商品化疫苗均存在不同的弱点，不能对猪群提供完全保护，开发新型PRRSV疫苗的研究仍在不断进行。本研究的另外一个目标是探索口腔液在实验室条件下评估候

6、选疫苗效果时的作用。以二乙烯亚胺(binaryethylenimine,BEI)灭活PRRSV-VR2332病毒，选择性的将灭活的病毒抗原与荆豆凝集素(UlexEuropaeusAgglutinin,UEA)一起包埋于聚乳酸-聚羟乙酸(polylactide-co-glycolide，PLGA)中，制成纳米颗粒疫苗，然后将纳米颗粒疫苗分别与4种候选佐剂共同免疫实验动物，经2次鼻内喷雾接种后，用PRRSV-MN184进行攻毒试验以评价疫苗的交叉免疫保护能力。通过对黏膜相关组织(肺，支气管淋巴结，支气管肺泡灌洗液)，血清以及口腔液的免疫相关性研究发现

7、，第8试验组灭活VR2332纳米颗粒疫苗与4号佐剂(NP-VR+Adjuvant4)产生的免疫效果较好，实验动物可以获得较好的交叉保护，具体表现为：(1)黏膜相关组织的PRRSVRNA拷贝数低，攻毒后第9天血清中的PRRSV被完全清除，攻毒后第15天口腔液中病毒RNA检测结果阴性；(2)肺和支气管肺泡灌洗液中检测到高滴度的PRRSV中和抗体，攻毒后第15天可以在口腔液中检测到中和抗体；(3)肺和支气管肺泡灌洗液中PRRSV特异性IgG应答显著增强，血清和口腔液中呈现高水平的IgA和IgG应答。这是应用口腔液样品与血清等其它样品一起筛选候选疫苗的首

8、次尝试，口腔液中的PRRSVRNA拷贝数，中和抗体滴度和特异性IgAII和IgG反应等结果为疫苗的免疫效果评估提供了重要参考价值。本研究