流感病毒致心脏发育异常的表观遗传分子机制研究

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1、学校代码10542密级学号2Q!!Q21垒122垒流感病毒致心脏发育异常的表观遗传分子机制研究EpigeneticMolecularMechanismofAbnormalHeartDevelopmentCausedbyInfleuzaVirus研究生姓名指导教师姓名、职称学科专业研究方向湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年三月摘要先天性心脏病(先心病)是一类严重危害人类健康的疾病，在新生儿中的发生率为4．05～12．3％o。环境因素与遗传因素是先天性心脏病发生的主要原因。其中，孕早期宫内病毒感染是最为重要的环境因素之一。临床流行病学调查表明，有15

2、种病毒的早期宫内感染可能会引起心脏发育异常，进而导致先心病的发生。近年来关于先天性心脏病的发生的遗传机制取得了许多进展，但是目前对病毒引起先天性心脏病的分子发生机制还不清楚。本研究以BALB／c小鼠作为模式动物，在小鼠胚胎发育E7．5天通过鼻腔滴加的方法对孕母鼠进行H1N1流感病毒感染，构建HINl流感病毒小鼠模型。通过数字基因表达谱技术筛选，发现在感染流感病毒后胚胎心脏的表观遗传相关基因表达出现差异。选取BAF染色质重塑复合物及其信号途径为研究对象，从RNA以及蛋白水平验证分析BAF染色质重塑相关基因及其下游Wnt信号和部分心脏发育关键基因的表达变化。

3、本文得到了以下研究结果：1、利用数字化表达谱技术分析病毒组和正常组中表观遗传相关基因的表达情况，并进行筛选，经RT．PCR半定量分析发现25个表观遗传相关基因的结果与表达谱的结果一致，其中11个基因表达上调，14个基因表达下调。2、表观遗传相关基因中BAF染色质重塑复合物出现显著性差异表达，并筛选出BAF染色质重塑基因及其下游Wnt信号和部分一tl,脏发育关键基因进行进一步研究。3、对BAF染色质重塑相关基因进行RT．PCR半定量分析，以E11．5天的胚胎心脏为材料，得到一致的RT．PCR结果：11组基因结果与表达谱的结果一致，并且都是下调的。4、对Wn

4、t信号下游基因进行蛋白表达水平分析，发现在病毒组中Sfrp2和Gata4的表达与数字表达谱的结果一致，均出现了下调。本论文利用数字化表达谱技术筛选到在H1N1流感病毒感染孕鼠的胚胎心脏中表观遗传相关基因出现了显著差异表达。并且BAF染色质重塑复合物及其下游Wnt信号和部分心脏发育关键基因的表达也出现下调。提示表观遗传染色质重塑基因及其信号途径可能是流感病毒感染导致先天性心脏病发生的一个重要分子调控途径，本论文为进一步深入研究环境因素致先心病发生的分子机制研究提供了一定的前期理论基础。关键词：H1N1流感病毒；表观遗传；先心病；小鼠模型；数字基因表达谱AB

5、STRACTCongenitalheartdisease(CHD)isakindofdiseasethatcauseseriousdamagetohumanhealth，theincidenceinthenewbornsis4．05～12．3％o．Environmentalfactorsandgeneticfactorsarethemainreasonsforcongenitalheartdisease．Amongthem，intrauterinevirusinfectionisoneofthemajorenvironmentalfactors．Clin

6、icalepidemiologystudiesshowsthatthereareatleast15virusthatmaycauseabnormalheartdevelopmentinmiceandleadingtotheoccurrenceofcongenitalheartdisease．Recently，thestudyongeneticmechanismofcongenitalheartdiseasegotalotofprogress．However，themolecularmechanismsofcongenitalheartdiseasecau

7、sedbyvirusinfectionremainsunclear．Inthisstudy，BALB／cmicewereusedasexperimentalanimals．InordertoobtaineH1N1influenzavirusinfectionmice，E7．5dpregnantmicewereinfectedwithH1N1influenzavirusbynasaldroppingaccordingtothedevelopmentofheartinembryonic．Epigeneticrelatedgenesdifferentially

8、expressedinH1N1influenzavirusinfectionmi