猪传染性胸膜肺炎放线杆菌lamp检测方法的建立及apxⅳ毒素部分功能研究

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1、万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生躲筋带如、尹年6月I7日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅

2、，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。研究生签名：釜：勋声导师签名：乡匀滓★训f年‘月J／日切．炒年‘月7／日万方数据摘要／⋯／IWIINI

3、一片段，并将其连接至pMDl8．T质粒成功构建克隆载体，再通过酶切将目的片段连接至pET21a(+)成功构建表达载体并转化表达菌BL21，通过各位表达条件的优化，成功表达了目的蛋白，经过经过破碎菌体及SDS．PAGE检测，蛋白以包涵体的形式表达。将重组表达的蛋白进行纯化、复性步骤后，经Western．blot抗原性分析表明所得到的重组蛋白纯度较高且具有良好的反应原性。再通过盐析的方法提取了APP5型的ApxI、ApxII两种溶血外毒素。最后，将灭活的含有不同剂量的重组表达ApxIV与灭活的ApxI、ApxII、灭活菌使用白油为佐剂分别

4、制备疫苗，采取背部多点注射的方式免疫小鼠，再以我国常见的血清5型的强毒株以10倍于LD50的剂量进行攻毒，结果显示，各组疫苗中随着重组ApxIV含量的增加，其免疫保护率也随之升高，表明本研究所重组的ApxIV能提供给免疫小鼠对相同血清型细菌攻毒一定的免疫保护作用。综上所述，重组的ApxIV作为额外成分添加后可增强亚单位疫苗的免疫保护力，但是，至于是如何提高灭活苗免疫保护效果的，其机理还有待进一步研究。关键词：猪传染性胸膜放线杆菌；LAMP；ApxIV；免疫保护万方数据ABSTRACTPorcineContagiousPleuropne

5、umoniaiscausedbyActinobacilluspleuropneumoniaeandleadstopleurisyandpneumoniainpigsischaracterizedbyanacuteorchronicdisease．Inrecentyears，thisdiseaseiswidelypopularintheworldoftheindustrializedcountriesinthepig，tobringgreatlosstothepigindustry,islistedasoneofthefivemajor

6、infectiousdiseasetoharmthepigindustryworldwide．Forthepreventionofthisdiseasebycellinactivatedvaccineto，butbecausetheserotypesofAPParenumerous，andeachserotypecrossprotectionbetweenpowerCO．，coupled、ⅣitlltheinactivatedvaccineAPPismissinginthegrowthprocesssecretionoftoxins，

7、thesetoxinshavebeenprovedthattheantigeniccomponentsofAPPimportantprotectiveantigenandinactivatedprocessexistsmoreorlessdamageandloss，inactivatedvaccineinthepreventionofthisdiseaseisnotveryprominenteffect．Therefore，tostudythediseasevaccinehasbecomemanyresearchersincludin

8、gforeign，attention，hasbecomeahotspotinthefieldofinfectiousdiseasesofpigs．Thisstudyisdividedintotwoparts，asfoll