缢蛏多巴胺受体基因的克隆、表达及其在免疫和幼虫发育中的功能初探.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150101087上海海洋大学硕士学位论文缢蛏多巴胺受体基因的克隆、表达及题目：其在免疫和幼虫发育中的功能初探Cloning,expressionandfunctioninimmune英文题目：andlarvaldevelopmentofdopaminereceptorgeneinSinonovaculaconstricta专业：水产养殖研究方向：贝类种质资源与遗传育种姓名：杜蕴超指导教师：牛东红教授，李家乐教授二O一八年四月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学

2、位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文缢蛏多巴胺受体基因的克隆、表达及其在免疫和幼虫发育中的功能初探摘要缢蛏（Sinonovaculaconstricta）是我国重要的经济贝类，具有良好的发展前景。缢蛏的养殖先在南方兴起，而后由南到北发展，因其肉质鲜美，成为我国重要的经济贝类。多巴胺受体作为神经系统中重要的神经递质受体，为国内外学者所关注。多巴胺受

4、体在感觉、运动、免疫、摄食、生长发育等生物学过程中都是重要的调节者和参与者。本研究通过RACE技术克隆得到缢蛏两个多巴胺受体基因，分析了基因的序列特征和时空表达特征；通过抑制剂筛选实验，基于多巴胺受体的药理学特征鉴定出多巴胺受体类型，并筛选出适合缢蛏D2类多巴胺受体的抑制剂和作用浓度。探究了多巴胺受体在损伤修复中的作用，基于筛选出的抑制剂探究鳗弧菌感染之后的免疫应答反应，并检测超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)和过氧化氢酶（Catalase，CAT）的含量变化，初步探究了D2类受体在缢蛏幼虫发育阶段中的作用。具体

5、的研究成果如下：1缢蛏多巴胺受体的克隆及其选择性多聚腺苷酸化（alternativepolyadenylation，APA）变异体从缢蛏转录组中得到两个多巴胺受体的基因片段ScDopR1和ScDopR2，经过RACE克隆获得两个基因的cDNA全长，ScDopR2-1基因全长2216bp，包含5’UTR区171bp，ORF区1814bp，3’UTR区231bp，共编码597个氨基酸残基；ScDopR2-2基因发现两个可变多聚腺苷酸化变异体，包含相同的ORF区和5’UTR区，ORF区长1440bp，编码479个氨基酸残基，5’UTR区长34bp，

6、两个变异体的区别在于3’UTR区域的长短，ScDopR2-2b基因在polyA尾前比ScDopR2-2a基因多出了960bp，ScDopR2-2a变异体cDNA全长1824bp，ScDopR2-2b变异体cDNA全长2758bp。基因序列特征的分析和功能域的预测结果显示，两个受体均具备G蛋白偶联受体的典型结构域，以及具有较长的第三胞内环以及较短的C-末端，基于D2类受体的结构特征，初步推测两个多巴胺受体均为D2类多巴胺受体。I上海海洋大学硕士学位论文2缢蛏多巴胺受体的时空表达特征分析利用荧光定量PCR检测了多巴胺受体在缢蛏成体组织的表达情况，

7、结果表明，两个基因在斧足、肝、鳃、水管、唇瓣、外套膜、性腺中均有表达，ScDopR2-1在水管和唇瓣中的表达量最高，在斧足、鳃和外套膜中的表达量次之，在肝和性腺中的表达量最低。ScDopR2-2基因同源区段和ScDopR2-2b基因的表达模式基本相同，表达量最高的组织均为水管，在水管、鳃、斧足中的表达量显著高于其他组织。ScDopR2-2基因同源区段与ScDopR2-2b相比，组织的表达量也存在差异性，ScDopR2-2基因同源区段的表达量在鳃中高于斧足，而ScDopR2-2b基因在鳃中的表达与斧足的大致相同。多巴胺受体在缢蛏早期发育阶段的检

8、测结果表明，ScDopR2-1基因在匍匐期表达量最高，在D型期表达量次之，在这两个时期出现两个表达量峰值，呈现出先增加再减少再增加再减少的表达模式。而ScDopR2