血管抑素滴眼剂制备及其药代动力学的相关研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文血管抑素滴眼剂制备及其药代动力学的相关研究ResearchonthePreparationandthepharmacokineticsofAngiostatin课题来源：广东省科技基础条件建设项目编号：20098060700117学位申请人王芳导师姓名刘海俊教授专业名称眼科学培养类型专业型培养层次硕士研究生所在学院南方医科大学研究生学院2013年3月28日广卅硕士学位论文血管抑素滴眼剂制备及其药代动力学的相关研究硕士研究生：王芳指导教师：刘海俊教授摘要一、研究目的眼部新生血管性疾病是多种致病因素所致的眼部并

2、发症，是损害视力的主要因素之一，包括由于烧伤或移植而引起的角膜血管新生、各种原因引起的脉络膜血管新生及糖尿病引起的视网膜病变。作为一种血浆纤溶酶原的降解片段，血管抑素(angiostantin，As)以其强大的抗血管生成作用受到了人们的极大关注，自1994年O’Reilly等在荷兰小鼠血清及尿中发现至今的近20年中，国内外的研究者对其分子结构、抗血管生成的分子机制及提取方法进行了深入而广泛的探讨，并取得了可喜的成果。多年来，伴随着血管抑素的制备方法日臻完善，国内外许多学者已应用血管抑素对角膜、脉络膜、视网膜等眼部新生血管性疾病的防治工作做了

3、大量的基础和临床研究，取得了显著的效果。而目前国内外血管抑素的相关研究仍停留在动物实验阶段，为了推动血管抑素更早更快的进入临床应用，如能对血管抑素滴眼液的制备方法加以优化，明确其处方，势必将极大推动血管抑素在临床的运用。因此，以《中国药典》2010年最新版相关内容为依据，在借鉴前人相关成功经验的基础上，本研究拟对血管抑素滴眼液的制备工艺进行完善，选择合适的处方制备重组人Kringle1．3血管抑素滴眼剂，对血管抑素滴眼液的外观、理化性质进行考察，运用紫外光谱法与Draize法分别对重组人Kringle1．3血管抑素滴眼剂的稳定性与刺激性进行

4、研究。高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)i贝U定血管抑素滴眼液在摘要玻璃体中的浓度及分布，拟阐明血管抑素滴眼液的药代动力学。通过其在眼内药代动力学指标的检测，确定血管抑素的处方，旨在探索一种可用于临床治疗新生血管性疾病的血管抑素滴眼剂，以期规模化生产，使其适用于临床工作的需要，造福人类。二、研究方法与过程1、血管抑素滴眼剂的制备：配制含0．1％制备量的玻璃酸钠(滴眼液级)的磷酸盐缓冲溶液适量，称取0．01％制备量的苯扎氯铵，溶解于适当体积的磷酸盐缓冲液中，加入玻璃酸钠溶液，后向

5、其中加入质量分数为O．1％的EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠盐)，充分混匀，补加注射用水至制备量，即得血管抑素滴眼剂赋形剂溶液。将血管抑素滴眼剂赋形剂溶液于超净工作台中用0．22I．tm微孔滤膜除菌过滤得无菌血管抑素滴眼剂赋形剂溶液，量取适当体积无菌赋形剂溶液溶解适量重组人Kringle1．3血管抑素原料药，涡旋震荡至澄清透明，配制质量分数为0．01％(即质量浓度为10099／m1)血管抑素滴眼剂若干，封装，即得重组人Kringle1．3血管抑素滴眼剂。2、血管抑素滴眼液质量控制：1)性状：采用留样观察法，观察血管抑素滴眼液的颜色、澄明度

6、，鉴定是否存在异物。(按照《中国药典》2010版附录Ⅸ关于澄明度及可见异物的检查法进行测定)；2)血管抑素滴眼液pH的检测：使其pH符合《中国药典》2010年版有关滴眼液的规定。3)血管抑素滴眼液含量的测定：紫外吸收光谱法测定血管抑素滴眼液中血管抑素的含量；4)血管抑素滴眼液的刺激性检验：采用新西兰大白兔作为实验模型，运用Draize试验进行评价；5)血管抑素滴眼液的稳定性检验：因为常温下血管抑素理化性质不稳定，所以将血管抑素滴眼剂样品分别置于4。C+1℃及一20。C+2℃条件下保存，观察样品放置1月、3月及5月的外观、澄明度及可见异物(沉

7、淀)，分别测定放置1、3、5月时样品于280nm处的吸光度值，计算各时间点吸光度均值，评估重组人Kringle1—3血管抑素滴眼剂样品第1、3、5月相对于0个月的主药含量下降值，考察滴眼剂的稳定性。硕士学位论文3、血管抑素滴眼液在兔眼内组织的分布：健康、无眼疾新西兰大白兔10只，随机分成5组，每组2只4眼，血管抑素滴眼液滴眼给药后选取0．5、1、2、5、8h5个取材点，各取材点取2只新西兰大白兔共4眼角膜、房水及玻璃体组织，高效液相色谱法测定给药0．5、1、2、5、8h后血管抑素滴眼液在角膜、房水及玻璃体中的浓度计分布(重复此实验巾的HPL

8、C实验2次)，绘制标准曲线并考察精密度及回收率。4、血管抑素滴眼液眼内药代动力学的检测：将兔眼角膜、房水及玻璃体组织中的药物浓度经实用药物动力学程序(3p97)进行拟合，拟合出符