利用分子马达技术对副溶血性弧菌进行快速分型检测方法的研究

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1、摘要谨以此论文献给我敬爱的导师及关心爱护支持我的家人、朋友！----杨龙超摘要利用分子马达技术对副溶血性弧菌进行快速分型检测方法的研究StudyonmoleculartypingmethodforVibrioparahaemolyticusbasedonmolecularmotorbiosensor学位论文完成日期：指导教师签字：潘鲁青答辩委员会成员签字：宋林生黄倢李成林马绍赛马甡摘要独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的

2、研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：杨龙超签字日期：年月日--------------------------------------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构

3、送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：杨龙超导师签字：潘鲁青签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要食源性致病菌是引起食源性疾病的重要因素之一，对人类健康造成极大的危害，是食品安全的重大隐患。在临床诊断、

4、流行病学调查、食品中微生物检测及医院感染监控等方面，致病菌的分子分型及检测是必不可少的内容。以受控分子马达技术为核心，集成免疫识别、荧光探针标记与检测、阵列微接触印刷和LED光源编码控制等技术，在食源性病原菌分子马达检测技术的基础上，建立一种快速、高通量的对同种或同属食源性致病菌进行快速分型检测的新方法。本论文首先提取嗜热菌载色体，荧光探针F-DHPE标记载色体，制备F0F1-ATPase上的ε亚基抗体，并用生物素标记N’端，以副溶血性弧菌毒力基因tdh、trh和种特异性基因tlh、toxR为靶基因设计4个探针，并用生物素标记5’端，然后将ε亚基

5、抗体与F0F1-ATPase结合，通过“生物素-亲和素”系统将探针与F0F1-ATPase连接构建F0F1-ATPase分子马达生物传感器。提取副溶血性弧菌的DNA，应用构建的F0F1-ATPase分子马达生物传感器对其进行分型检测，一方面，对种特异性基因tlh、toxR的检测可以对副溶血性弧菌进行检测鉴定；另一方面，对毒力基因tdh、trh的检测可以对副溶血性弧菌是否具有毒性进行分型判断；对分子马达分型检测方法进行特异性、灵敏度等进行了验证，对载色体添加时间、荧光素酶添加时间、反应温度等对分型检测的影响进行了研究，对分型检测方法进行了优化，最终

6、建立了用于副溶血性弧菌致病性快速分子分型的F0F1-ATPase分子马达分型鉴定方法。通过对实际样品进行检测，证明该方法具有简便、快速、省时、省力、特异性高、灵敏度高等优点，为副溶血性弧菌的快速分型检测提供了一种有效工具。关键字：副溶血性弧菌;F0F1-ATPase;生物传感器；分子分型；检测；tdh；trh；tlh；toxRAbstractStudyonmoleculartypingmethodforVibrioparahaemolyticusbasedonmolecularmotorbiosensorAbstractFoodbornepath

7、ogenicbacteriathatisoneoftheimportantfactorsthatcausefoodborneillnessdogreatharmtohumanhealth,andisagreatthreattofoodsafety.Detectionandmoleculartypingofpathogenicbacteriaareindispensablecontentinclinicaldiagnosis,epidemiologicalinvestigation,detectionoffoodmicrobiologyandcon

8、trolofhospitalinfection,etc.ChromatophorefromThermomicrobiumroseumwa