盐酸小檗碱对jurkat细胞凋亡及survivin基因表达的影响

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1、中图分类号UDCR733．7610硕士学位论文学校代码密级10533盐酸小檗碱对Jurkat细胞凋亡及SuⅣivin基因表达的影响影HIuJEf-fectsofberberinehydrochlorideontheapoptosisandexpressionofSurVivingeneinJurkatceUs作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：万奔明临床医学内科学中南大学湘雅医院李晓林论文答辩日期兰：!三堡翘乡岁日答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

2、研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：互扯日期：址年上月驾日j学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录

3、到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。拓者躲单导师签麴触旦链月字日盐酸小檗碱对Jurl‘at细胞凋亡及Survivin基因表达的影响摘要急性淋巴细胞白血病(ALL)是源于单个B或T淋巴细胞前体细胞的恶性肿瘤。ALL好发于儿童及青少年，在儿童中预后较好，在成人中，使用标准化疗方案往往可以实现首次缓解，但是复发率高达70．80％，传统化疗药物对正常组织特别是造血系统的毒性作用限制了化疗药物的使用剂量，因此寻求高效低毒的治疗手段成为目前研究的热点。小檗碱可以从中药黄连、黄柏和三颗针等小檗属植物中提取，现代研究表明小檗碱对多种

4、实体肿瘤及血液系统肿瘤均表现出抗肿瘤活性，其主要作用为诱导肿瘤细胞凋亡，细胞周期阻滞，抑制肿瘤新生血管生成，而对正常组织副作用小。本实验主要研究盐酸小檗碱对人白血病Jurkat细胞细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期及SuⅣivin基因表达是否存在影响。我们采用了改良MTT法测定Jurkat细胞的IC50及细胞毒作用，Hoechst33342荧光染色法观察细胞核的变化，流式细胞术AImexinV-FITC+PI法检测细胞凋亡，PI单染法检测细胞周期，半定量ImPCR法检测Survivin基因表达。结果显示，在O．10斗咖l药物浓度范围，Jurkat细胞

5、的生长是明显受抑制的，随着盐酸小檗碱浓度增大Jurkat细胞生长率逐渐减低，说明盐酸小檗碱对Jurkat细胞的抑制作用呈浓度依赖性。盐酸小檗碱24小时、48小时、72小时作用Jurkat细胞的IC50值分别为：6．94¨咖l、3．94p咖l、2．45“咖l，说明盐酸小檗碱对Jurkat细胞的生长抑制作用亦呈时间依赖性。O“咖l及5“咖l盐酸小檗碱作用于Jurkat细胞48小时后，通过Hoechst染色，Jurkat细胞细胞核出现凋亡改变：细胞核变形，核质浓缩，并出现凋亡小体。AmexinV_FITC+PI法检测盐酸小檗碱对Jurkat细胞凋亡后

6、发现，O，O．1，O．5，1，5，10u咖l盐酸小檗碱处理Jurkat细胞48h后，早期凋亡细胞比例分别为：2．06％土0．51％，3．60％士1．05％，3．38％士1．37％，3．97％土1．53％，12．77％士1．07％，14．27％士2．11％。PI单染检测结果显示，细胞周期阻滞于S期，同时，RT-PCR检测显示SuⅣivin基因表达下降。综上所述，盐酸小檗碱对Jurkat细胞有抑制增殖、诱导凋亡和周期阻滞作用，可能与盐酸小檗碱下调Jurkat细胞SuⅣivin基因表达有关。图7幅，表3个，参考文献41篇。关键词：盐酸小檗碱；细胞凋亡

7、；周期阻滞；Jurkat细胞；Survivin基因分类号：R733．7IIIE舵ctsofberbemehydrochlorideontheapoptosisandeXpressionofSurViVingeneinJurkatcellsABSTRACTAcutelymphoblasticleukemia(ALL)isamali印anttumorderiVed仔omasingleBorTlymphocyteprecursorcells．ALLwascommoninchildrenaJldadolescent，、Ⅳhichhadabetterpr

8、ogIlosisinchildren．Inadults，theuseofstandardchemotherapycouldoRenachievethe