小檗碱对金黄色葡萄球菌诱导的ecv―304细胞凋亡相关基因的影响

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1、小檗碱对金黄色葡萄球菌诱导的ECV―304细胞凋亡相关基因的影响摘要：目的：研究小檗碱对金黄色葡萄球菌（S.aureus）诱导ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的调节作用。方法：小檗碱（Berberine，BBR）预处理ECV-304细胞2h后，用S.aureus感染细胞，采用半定量RT-PCR及Western-blot法检测金黄色葡萄球菌感染后ECV-304细胞内Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果：小檗碱预处理ECV-304后再感染S.aureus可显著性增加凋亡相关细胞因子Bcl-2mRNA水平及蛋白表

2、达量，而Bax和Caspase-3表达下调。结论：小檗碱可以调节S.aureus诱导的ECV-304细胞内凋亡相关基因的表达，抑制ECV-304细胞凋亡。关键词：小檗碱；金黄色葡萄球菌；ECV-304；凋亡EffectsofberberineonapoptosisrelatedgenesofECV-304cellsinducedbystaphylococcusaureusPeide-cui，Xiongchuan-yin，Biai-fen，Huhan-binAbstract：10DepartmentofClinicalLaboratory，GuangzhouHospitalofIn

3、tegratedTraditionalChineseandWesternMedicine，Guangzhou，Guangdong510800，ChinaAbstractObjective：TostudytheprotectionofberberineagainstECV-304apoptosisinducedbyStaphylococcusaureus（S.aureus）viaregulatingBcl-2，Baxandcaspase-3expression.Methods：ECV-304werepretreatedwith128μg/mLBBRfor2h，thenSaureus

4、wasadded.Theexpressionlevelsofapoptosisrelatedgenesweredetectedwithsemi-quantityRT-PCRandWestern-blot.Results：PretreatmentofBBRhelpedtosurviveinSaureus-inducedECV-304.BBRsignificantlyincreasedtheexpressionlevelsofBcl-2anddecreasedthatofBaxandCaspase-3afterstaphylococcusaureusinfection.Conclus

5、ion：BerberinecanregulatetheexpressionofapoptosisrelatedgenesofECV-304cellsinducedbyS.aureus.Keywords：Berberine（BBR）；Staphylococcusaureus（S.aureus）；ECV-304cells；apoptosis【中图分类号】R856.2【文献标识码】B【文章编号】1002-3763（2014）08-0003-0210小檗碱又名黄连素，是一种具有悠久药用历史的异喹啉类生物碱，临床长期用于抗肠道细菌感染[1]。研究表明，小檗碱能改善炎症细胞因子诱导的肠上皮细

6、胞内质网压力，下调细胞内JNK的磷酸化及caspase-12和caspsae-3水平，从而抑制炎症细胞因子诱导的细胞凋亡[2]。金黄色葡萄球菌可以感染并诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡[3]，在机体内，细胞凋亡有利于细菌侵入及毒素的扩散，从而引起组织损伤，抑制细胞凋亡对感染性疾病的控制具有一定意义。本实验的目的是了解小檗碱是否可以调节S.aureus感染的ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达，为治疗其感染提供理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株和细胞系：S.aureu标准菌株ATCC25923由本实验室常规保存，培养基为哥伦比亚血琼脂

7、平板（梅里埃）及LB培养基（Oxoid）。ECV-304由四川大学华西基础与法医学院微生物教研室保存并提供，细胞培养基为RPMI1640（Hyclone）。1.1.2主要试剂：10盐酸小檗碱购自本院药房（康和药业），RPMI1640培养基和胎牛血清（Hyclone），TRIzol试剂（Invitrogen），反转录试剂盒（Fermentas），PVDF膜（millipore），细胞裂解液和ECL试剂盒（Beyotime），一抗及羊抗兔IgG（Boster）。1.2方法1.2.1药