肝素前体多糖的分离纯化研究

《肝素前体多糖的分离纯化研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ZhejiangUniversityofTechnologyADissertationSubmittedforMasterofMedicineTitle：IsolationandpurificationofHeparosanAuthor：YANGMINGKANGAdviser：Q!趔』!垦Major：．．PharmaceuticalChemistry_．CollegeofPharmaceuticalScience，Zhl：jiangUniversityofTechnology,helannlversltvoI1eclanologv,April，2013浙江工业大学学位论文原创性声明

2、本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。作者虢移时怒隰年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

3、用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于作者签名：导师签名：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。(请在以上相应方框内打“√”)日期：年月日日期：l严G月)日浙江工业大学硕士学位论文肝素前体多糖的分离纯化研究摘要肝素前体多糖是脊椎动物在催化合成肝素的过程中产生的前体物质，该物质经过一系列的硫酸化及异构化修饰后即可合成肝素。本研究以E．ColiK5发酵液为原料，对肝素前体多糖的提取除杂、分离纯化、检测以及结构鉴定进行了研究。研究结果如下：1。采用有机溶剂沉淀的方法，经过提取得到的肝素前体多糖粗品为淡黄色粉末物质，其糖醛酸含量为23．9％；对提取的粗

4、多糖进行了除杂工艺研究，优化了双氧水氧化法脱色和Sevage法除蛋白的工艺条件。经综合考虑双氧水氧化法脱色的最佳条件为：双氧水浓度为1．5％，温度为256C，时间为3h，多糖的脱色率为67．35％；Sevage法除蛋白的最佳工艺条件为氯仿：正丁醇(v／V)为4：1，样品：试剂(W／W)为1：1，萃取时间10min，萃取次数为3次，在此条件下多糖的除蛋白率为76．59％。2．研究了乙醇沉淀法对多糖纯化效果的影响。结果表明，当heparosan多糖浓度为14％(WⅣ)、Nacl浓度为3％(W／V)、乙浙江工业大学硕士学位论文醇浓度为70％(V／V)，重复沉淀4次时，纯化物中的葡萄糖醛酸

5、含量可达44．52％(W／W)，多糖的得率为43．50％(W／W)。3．研究了壳聚糖沉淀法对多糖纯化效果的影响。当壳聚糖用量为4．0mg时，得到沉淀的多糖回收率为94％(W／W)。沉淀继续纯化得到多糖纯品，其糖醛酸含量为45．69％，得率为40．36％。4．研究了DEAESepharosefastflow离子交换法对多糖纯化效果的影响。经过该法纯化的多糖其糖醛酸含量为49．35％，得率为38．52％。5．对多糖的糖醛酸含量、纯度、分子量和理化性质进行了检测和鉴定。硫酸．咔唑法测糖醛酸含量的最优条件是：水解温度为25。C、硼砂-硫酸用量为4mL、水解时间为20rain、咔唑一乙醇用量

6、为O．15mL、显色时间为10min。通过重现性实验、稳定性实验以及回收率实验证明了这一方法的可靠和准确。采用高压凝胶渗透色谱法(HPGPC)对多糖的纯度和分子量进行了鉴定，结果表明离子交换法得到的多糖纯度最高(接近100％)，其分子量为4．5x104Da；并对多糖的理化性质进行了分析，结果符合该多糖的相关特征。6．通过紫外、红外、核磁、单糖组成、二糖结构几个方面对肝素前体多糖的结构进行了鉴定，结果表明其分子结构为[◆4)p．D．葡萄糖醛酸(1啼4)0c-D—N一乙酰．葡萄糖胺(1◆]n。II浙江工业大学硕士学位论文关键词：肝素前体，多糖，分离，纯化IIl浙江工业大学硕士学位论文I

7、SOLATIONANDPRUFICATIONOFHEPAROSANABSTRACTHeparosanisaprecursorsubstanceproducedintheprocessofcatalyticsynthesisofheparinbythevertebrates．Itcansyntheticheparinthoughaseriesprocessofsulfatedandisomerization．Inthisdissertation，theextractio