真核肽链释放因子erf3agspt1对大鼠肝纤维化模型的作用

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权l闩河北医科大学所有。河北医科大学有权利对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表匀学位葩义王茭内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。。1·研究生签名：暖．导师签研究生学位论文独创性声明学院签章：弓月留日本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指

2、导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：妇．导师签章：却丸协l>年弓月啄日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文真核肽链释放因子eRF3a／gsptl对大鼠肝纤维化模型的作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附图⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．30讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35综述肝脏疾病中细胞凋亡的机制及其生物标志物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50中文摘要真核肽链释放因子eRF3a／gsptI对大鼠肝纤维化模型的作

4、用摘要目的：我国慢性肝病中主要以慢性乙型肝炎最多，由于肝炎病毒复制，病毒刺激机体的免疫防御系统，导致免疫防御系统的淋巴细胞在清除病毒时，“误伤"肝细胞，产生肝脏内炎症，从而诱导了纤维组织过度增生，致使肝纤维化。肝纤维化的病理改变主要是细胞外基质过度沉积在肝脏中，大多数慢性肝病有不同程度的肝纤维化，这是一种常见的病理基础，表现为肝细胞胶原蛋白等细胞外基质合成增加，降解相对不足，从而使细胞外基质过度沉积在肝脏中。如果进一步发展则会引起肝小叶改建，假小叶结节形成，其中25％---40％最终发展成肝硬化和肝癌。因此，在治疗慢性肝病时阻断肝纤维化已成为一

5、个关键的问题。肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化共同的病理基础，而目前常规肝功能检查只能反映肝脏功能，无法测知肝纤维化程度。依据肝穿刺活体组织检查，也难以对肝纤维化进行动态观察及疗效评估。真核肽链释放因子是在真核生物中参与细胞内蛋白质合成终止过程中新生肽链释放的一组重要的蛋白质，包括两类，即eRFl和eRF3。有研究显示，eRF3a／gsptl是哺乳动物翻译终止过程中的主要因子，它的表达水平影响eRFl蛋白的稳定性，并且决定着终止复合物的形成，因此我们在此次试验中调节了eRF3a／gsptl的表达水平，观察不同的eRF3a／gsptl的表达水平

6、是否对肝纤维化产生影响。方法：lgsptl基因克隆。采用DNA提取试剂盒提取大鼠全基因组DNA，PCR扩增获得gsptl。将gsptl基因克隆至eGFP．C2载体，应用碱裂解法提取质粒，进行双酶切鉴定及测序分析。2肝纤维化模型建立。100只SD大鼠腹腔内注射5％四氯化碳与橄榄油的混合物，剂量为5ml／kg，每周两次，注射8周。造模过程动物饲水中加入25mg／L的苯巴比妥。正常对照组大鼠14只，按模型建立组的同样程序腹腔内注射橄榄油8周。模型大鼠CCL4处理四周之后分别用构建的重组质粒处理、秋水仙碱阳性对照处理，其中质粒处理组分为5个亚组：中文摘

7、要CCL4+eGFP—C2-gsptl质粒O．125mg／kg每周一次组(treated1)、CCL4+eGFP．C2-gsptl质粒O．125mg／kg每周两次组(treated2)、CCL4+eGFP．C2-gsptl质粒0．25mg／kg每周一次组(treated3)、CCL4+eGFP．C2-gsptl质粒0．25mg／kg每周两次组(treated4)、CCL4+eGFP。C2-gsptl质粒0mg／kg每周一次组(模型组)，每组12只大鼠，经尾静脉快速注射质粒；阳性对照组为秋水仙碱，共14只，0．14mg／kg灌胃，1次／天；阴性对

8、照组为注射CCL4-t-eGFP．C2质粒O．125mg／kg每周一次组，共12只大鼠。观察重组质粒对肝纤维化的治疗作用。3肝功能检测。留取血清，使用