杂色曲霉素对体外培养人支气管上皮细胞(beas-2b)细胞周期影响的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归J一承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专否则，承担相应法律责任。研究生签名：彰I嘲导师签章河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研

2、究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：番叫导师签章：如『3年4月f1日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6研究论文杂色曲霉素对体外培养人支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞周期影响的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12日U吾⋯”⋯⋯⋯⋯一⋯”⋯一”⋯“⋯“一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“12材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯··19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23附表····-·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯·⋯⋯···34讨论⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯··⋯·⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯···⋯⋯·36结论⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39综述细胞周期蛋白与肿瘤的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56中文摘要杂色曲霉素对体外培养人支气管上皮细胞(BEAS．2B)细胞周期影响的研究摘要目的：杂色曲霉素(Sterigmatocystin，ST)是曲霉菌属、青霉菌属和离蠕孢霉属产生的一种代谢产物。其污染非常广泛，普遍存在于谷物、玉米、豆类、香料和动物饲料中。除粮食作物和饲料外，ST在室内环境中的污染也比较常见。鉴于ST的致畸性、致突变性和致癌性，国际癌症研究中心已将其确认为“可能的人类致癌物”。动物实验发现，ST可以引起小鼠发生肺腺癌；体外实验发现，ST可以诱发人胚肺细胞

5、发生恶性转化。提示ST具有致肺癌性。由于对应用人胚的顾忌，实验不能够继续进行。因此，对ST致肺癌机制的研究还远远不够。真核细胞通过复杂的细胞周期调控和凋亡系统来控制细胞的分裂增殖与死亡，从而维持机体的正常代谢和增殖。细胞周期调控失常时细胞会发生异常增殖，从而导致各种疾病的发生，甚至肿瘤的形成。当细胞发生DNA损伤后，细胞周期会停滞在某一时相为修复受损的DNA提供充足的时间，避免将该损伤遗传至子代细胞。体内和体外实验发现，很多真菌毒素(如T-2毒素、桔霉素、赭曲霉毒素等)对细胞的毒性作用均表现为可以诱导细胞发生周

6、期阻滞。此外，我们近期研究发现，ST处理能诱导人胃粘膜上皮细胞(GES．1)和人食管粘膜上皮细胞(Het-lA)发生G2期阻滞。研究表明ST可以诱导体外培养人肺癌细胞(A549)发生DNA损伤，但ST对正常人肺上皮细胞DNA损伤、细胞周期分布及其可能机制的研究尚未见报道。鉴于此，为探讨ST与人类肺癌发生的可能机制之间的关系，本研究选取人永生化支气管上皮细胞(BEAS．2B)作为研究对象，观察不同浓度ST处理对BEAS一2B细胞DNA损伤、周期分布的影响并从分子角度初步分析其可能的机制，以揭示ST对正常人肺上皮细

7、胞的毒性作用。方法：1细胞培养正常人永生化支气管上皮细胞(BEAS．2B)培养于含有10％胎牛血中文摘要清、100U／ml青霉素和100U／ml链霉素的DMEM／F12混合培养基中，37℃、5％C02培养，细胞贴壁生长。2噻唑蓝(MTT)L匕色法2．1单细胞悬液制备及细胞计数取对数生长期的BEAS．2B细胞，用0．25％胰酶+O．02％EDTA常规消化，吹打混匀后取10“l滴于血细胞计数板上在显微镜下计数。计算公式为：细胞数(个细胞／m1)=(4个大格细胞总数／4)X104X稀释倍数。2．2MTT比色法测定细胞

8、存活率用新鲜培养基调整BEAS．2B单细胞悬液浓度，使其终浓度为1x104个细胞／ml，接种于96孔培养板内，每孔200山。24h后吸掉上清液，加入低血清(1％)的DMEM／F12混合培养基，同步化处理24h后，更换新鲜的10％DMEM／F12混合培养基，同时给予ST，使其终浓度分别为O．06州、O．15脚、0．3脚、0．6riM、1．5州、3rim、6riM、12州、24出、48小、