核因子-κb在去甲斑蝥素诱导肝癌细胞smmc-7721凋亡中的作用

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2、工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：圣廖导师签章：‰韶吖卜年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文核因子．KB在去甲斑蝥素诱导肝癌细胞SMMC．7721凋亡中的作用—1L—二-月U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯．．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41综述核因子一KB与原发性肝癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59

4、个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60中文摘要核因子一_IcB在去甲斑螫素诱导肝癌细胞SMMC．7721凋亡中的作用摘要原发性肝癌主要由肝细胞癌(HCC)组成，是世界上人类最常见的恶性肿瘤之一，预后极差，5年生存率不到9％，每年HCC相关死亡的数量超过600000。核因子．rd3(Nuclearfactor-KappaB，NF—r．B)是一类具有多向转录调节作用的核蛋白因子，存在于多种组织的多种细胞中，具有广泛的生物学活性，激活后参与许多基因的转录调控，参与免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤发生等多种生物进程。

5、近年的研究表明NF—rd3与肝癌的发生、发展、耐药、浸润与转移关系非常密切。去甲斑蝥素(norcantharidinNCTD)是从天然斑蝥分离出来的斑蝥素脱甲基而成，它具有抗肿瘤、升高白细胞、抗病毒及调节免疫等作用，比斑蝥素毒副作用更小。目前已用于治疗原发性肝癌，食管癌等肿瘤的治疗。但NCTD在诱导肝癌细胞发生凋亡的过程中NF-r．B通路的变化及对JNK影响国内外少有报道。本实验通过观察NCTD作用于肝癌细胞SMMC一7721对细胞形态、增殖与凋亡的影响，并观察在加用NF—r,B特异性抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(pyrrolidinedit

6、hiocarbamate，PDTC)前后NF—r．B和JNK通路的变化，旨在探讨NF—r．B在肝癌细胞凋亡中的作用和意义及对JNK通路影响，从而进一步阐明NCTD治疗肝癌的机理，并为其进一步开发利用提供理论依据。目的：本课题旨在通过不同浓度NCTD作用SMMC一7721来观察其对肝癌细胞增殖与凋亡的影响，并加用PDTC抑制NF．r．B通路，探讨NF．rB在NCTD诱导肝癌细胞凋亡中的作用和意义及对JNK通路的影响。方法：1MTT法观察不同浓度NCTD作用SMMC一7721后其对肝癌细胞增殖的影响。2Hoechst33342染色通过对荧光显微

7、镜下形态学变化的观察研究NCTD对SMMC一772l凋亡的影响。3流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI法检测SMMC。7721细胞凋亡率来观察NCTD对SMMC一7721凋亡的影响。中文摘要(见Fig．2，Table3)3通过流式AnnexinV—FITC／PI法检测SMMC一7721细胞凋亡率观察NCTD对SMMC．7721凋亡的影响，并观察NF—vd3在NCTD诱导SMMC．7721细胞凋亡中的作用。结果显示NCTD干预SMMC一7721细胞48h后，各干预组(5u∥mlNCTD、20ug／mlNCTD、40ug／mlNCTD、P

8、DTC、PDTC+40ug／mlNCTD)SMMC一7721凋亡率(13．274-0．56％、36．80-4-0．36％、43．174-0．55％、17．534-0．52％、50