斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究

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1、硕士学位论文论文题目斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究研究生姓名张琼妍指导教师姓名陶敏专业名称肿瘤学研究方向肿瘤的基因诊断和基因治疗论文提交日期2013年4月斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究中文摘要斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究中文摘要【目的】血小板在肿瘤血行转移的过程中发挥重要作用。有研究显示肿瘤细胞表面的整合素（Integrin）α2、β1参与了肿瘤细胞与血小板的粘附过程。有研究显示斑蝥素（Cantharidin）及其衍生物对包括乳腺癌在内的多种肿瘤具有抗肿瘤活性。目前尚不清楚斑蝥素类药物是否能够影

2、响肿瘤细胞与血小板的粘附过程。斑蝥素及其衍生物是蛋白磷酸酶2A（ProteinPhosphatase2A，PP2A）的抑制剂。PP2A被抑制后，可导致多个信号通路中的关键激酶被激活。本研究拟检测斑蝥素及其衍生物，去甲斑蝥素（Norcantharidin，NCTD），对乳腺癌细胞株MCF-7生长、转移等生物学行为的影响，着重研究Cantharidin及Norcantharidin对乳腺癌细胞与血小板之间粘附能力的影响，并探讨其信号转导机制。【方法】通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测Cantharidin和Norcantharid

3、in对MCF-7细胞增殖能力的影响；通过平板克隆形成实验检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞克隆形成能力的影响；通过流式细胞术（Annexin-V/PI双染法）检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞的凋亡诱导作用；通过划痕实验检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞迁移能力的影响；通过MTT法检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞粘附能力的影响；通过流式细胞术检测MCF-7细胞与CFDA-SE（Ca

4、rboxyfluoresceindiacetate,succinimidylester）标记的洗涤血小板的粘附能力；应用实时定量PCR（real-timefluorescencequantitativePCR，real-timePCR）检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞中整合素α2、β1mRNA表达的影响。通过流式细胞术检测Cantharidin和Norcantharidin对MCF-7细胞表面整合素（Integrin）α2蛋白分布的影响。通过小干扰RNA（SmallinterferingRNA

5、，siRNA）或信号通路抑制剂阻断激酶通路进行信号通路研究。I中文摘要斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究【结果】1.Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7细胞增殖，呈剂量和时间依赖效应。2.Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7细胞克隆形成，呈剂量依赖效应。3.Cantharidin和Norcantharidin诱导MCF-7细胞凋亡，呈剂量依赖效应。4.Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7细胞粘附，呈剂量依赖效应。5.Cantharidi

6、n和Norcantharidin抑制MCF-7细胞迁移，呈剂量和时间依赖效应。6.Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7细胞整合素α2mRNA表达，而对整合素β1mRNA表达水平无明显影响。7.Cantharidin和Norcantharidin下调MCF-7细胞表面整合素α2蛋白水平。8.Cantharidin和Norcantharidin通过下调整合素α2表达抑制MCF-7细胞与血小板的粘附。9.阻断PKC通路可削弱Cantharidin和Norcantharidin对Integrinα2表达的抑制作

7、用，而阻断ERK、JNK、NF-κB通路则无明显影响。【结论】Cantharidin和Norcantharidin能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的生长、转移、迁移能力。建立了基于流式细胞术的肿瘤细胞和血小板粘附的检测技术，采用该技术我们发现Cantharidin和Norcantharidin可以抑制肿瘤细胞与血小板的粘附。Cantharidin和Norcantharidin通过PKC通路下调整合素α2的表达，抑制肿瘤细胞与血小板的粘附，从而抑制乳腺癌细胞血行转移的潜能，有望成为乳腺癌的有效治疗药物。关键词乳腺癌；血小板；粘附；斑蝥素；

8、去甲斑蝥素；PP2A；整合素α2作者：张琼妍指导教师：陶敏IICantharidinrepressestheadhesionbetweenMCF-7breastcancercellsandplateletsAbstractCantha