人乳头瘤病毒16在宫颈癌整合作用的研究

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1、学校代码：10023学号：B2010001067博士学位论文人乳头瘤病毒16在宫颈癌整合作用的研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：北京协和医院王丹向阳教授向阳教授，朱宝利教授妇产科学妇科肿瘤2013年4月主国医堂登堂陵j匕塞迹塑医堂瞳i童±硒壅生望些诠塞⋯¨．．．目录嘲删2英文缩略词表英文缩写英文全称中文译名APOTBLASTbpCFSsCSIDIPSDNAdNTPEBFIG0HPVHSILhTEIU、LINELNLSILLTRLVSINCBIPBSPCRQVRFS10PCRSCCSINE眦AmplicationofPapi

2、llomavirusOncogeneTranscripts乳头瘤病毒癌基因转录扩增BasicLocalAlignmentSearchTool碱基局部配对工具Basepair碱基对CommonFragileSites常见脆性位点cervicalstromalinvasion宫颈间质受累DetectionofIntegratedPapillomavirusSequences整合的乳头瘤病毒序列检测Deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸Deoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸Ethidiumbromide溴

3、化乙啶IntemationalFederationofObstetricsandGynecology国际妇产科联盟Humanpapillomavirus人乳头瘤病毒High．gradesquamousintraepitheliallesion高度鳞状上皮内病变Humantelomerasereversetranscriptase人端粒酶逆转录酶longinterspersedelements长的散在核重复序列LymphNode淋巴结Low．gradesquamousintraepitheliallesion低度鳞状上皮内病变longterminalrep

4、eatelements长末端重复序列lymphvascularspaceinvolvement淋巴血管间隙受累NationalCentreforBiotechnologyInformation国立生物信息技术中心Phosphate．bufferedsaline磷酸盐缓冲液Polymerasechainreaction聚合酶链式反应Qualityvalue质量评估RareFragileSites罕见脆性位点RestrictionPCR限制性PCRsquamouscellcarcinoma鳞状细胞癌shortinterspersedelemems短的散在核重

5、复序列Tris．acetate／EDTAbufferedsalineTris．醋酸／EDTA缓冲液3摘要研究背景：宫颈癌是妇产科最常见的恶性肿瘤之一，在几乎所有的宫颈癌中均可发现高危型人乳头瘤病毒(HPV)的感染。HPVl6是最常见的感染类型。高危型HPV病毒首先感染宫颈基底层上皮细胞，并且在低度以及高度上皮内瘤样变(LSIL，HSIL)中以游离形式存在，而在宫颈癌中则往往以整合状态存在。在不同程度宫颈病变中病毒整合事件的差异提示病毒整合可能在宫颈癌变的过程中发挥了重要作用。HPV病毒的整合会打断E2阅读框，并且重塑E6,E7启动子，使得E6，E7癌基因

6、持续表达。增高的E6，E7蛋白分别与抑癌基因P53和RB结合(控制细胞周期和细胞凋亡)，打断有丝分裂纺锤体的形成，导致染色体结构和功能的改变，促进宫颈病变的发展。既往的研究认为病毒整合位点在人染色体中往往是随机分布的，然而近年来更多的证据显示病毒整合的位点在染色体分布中有一定的倾向性，形成整合热点区域。脆性位点即为其中的热点区域之一。脆性位点极度不稳定，由于易发生缺失、转导以及扩增，因而有助于外来染色体和肿瘤相关病毒的插入。HPV病毒整合往往容易发生在脆性位点及其附近。本组研究的目的即使用DIPS．PCR的方法检测HPVl6阳性宫颈癌标本中病毒整合的部位

7、及其特征，并和临床病理因素结合讨论，分析病毒的整合位点、断裂位点来探索整合位点是否存在偏好性以及病毒整合与宫颈癌病情程度的相关性，以期对HPV16DNA在宫颈癌中的整合有更深一步的了解。研究方法：收集近1年来在本院妇产科因宫颈癌行根治性手术切除的肿瘤组织标本61份，提取癌组织DNA，并进行PCR扩增、DNA测序以确定HPV分型。对于HPVl6单一感染的癌组织，行DIPS．PCR，判断有无HPVl6整合及分析病毒整合位点和断裂位点特征。研究结果：1．在收集的47例HPVl6单一感染的宫颈癌组织样本中，共发现42次不同的整合事件。病毒整合位点在大部分染色体均

8、有分布，其中以3号及20号染色体发生次数最多。66．7％(28／42)的病毒整合