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时间:2019-03-04
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1、硕士学位论文Rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制THEREGULATORYANDMECHANISMOFRAP2ONMICROFILAMENTCYTOSKELETONSTRUCTURE杨美玲哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号:Q71学校代码:10213国际图书分类号:577.21密级:公开理学硕士学位论文Rap2对微丝细胞骨架结构的调控及机制硕士研究生:杨美玲导师:施树良副教授申请学位:理学硕士学科:生物学所在单位:生命科学与技术学院答辩日期:2015年6月授予学位单位:哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q71U.D
2、.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceTHEREGULATORYANDMECHANISMOFRAP2ONMICROFILAMENTCYTOSKELETONSTRUCTURECandidate:YangMeilingSupervisor:Prof.ShuliangShiAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpeciality:BiologyAffiliation:SchoolofLifeScienceandTechnologyDateof
3、Defence:June,2015Degree-Conferring-Institution:HarbinInstituteofTechnology摘要摘要Rap2属于Ras家族中的Rap亚族,Rap亚族包括Rap1和Rap2,大量文献显示Ras、Rap1具有调控细胞骨架,细胞粘附等功能,而Rap2与Rap1在氨基酸序列上有60%同源性,与Ras有46%同源性,且Rap2特异效应分子MAP4K4、MINK、TINK、PARG均提示Rap2与微丝细胞骨架可能存在联系,本文主要阐明Rap2与微丝细胞骨架关系及其调控机制,为深入研究Rap2信
4、号通路及其生物学功能奠定基础。本文首先利用免疫荧光方法静态比较在稳定表达和瞬时表达Rap2的微丝细胞骨架的形态改变情况,发现在Rap2过表达的NC65,CRL1932,CCF-RC-2细胞中,有60%以上细胞明显变圆,应力纤维排布明显紊乱,细胞失去原有铺展状态,且肌动蛋白与Rap2有共定位的趋势,其次利用活细胞工作站的方法动态观察Rap2对微丝细胞骨架动态变化,Rap2过表达的细胞中,细胞极性消失,微丝骨架紊乱,Rap2干扰后细胞运动能力减慢,应力纤维减弱,并提前进入凋亡状态。对于机制的探索,利用GST-PullDown实验发现在Rap
5、2过表达的细胞中,Rap2显著下调RhoA蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性;免疫荧光方法在CRL1932、CRL1933瞬时表达Rap2后分别FAKY397、Paxillin,Vinculin染色,发现在Rap2过表达后,约60%细胞极性丧失或者伪足呈均一化分布,且Rap2抑制FAKY397磷酸化水平。综上所述,Rap2对微丝细胞骨架改变明显,通过下调Rho蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性和改变黏着斑分布极性等使细胞变小变圆,应力纤维减弱,应力纤维排布紊乱,微丝骨架紊乱。关键词:Rap2;微丝细胞骨架;Rho家族
6、蛋白;黏着斑蛋白I哈尔滨工业大学理学硕士论文AbstractRap2belongstoRasfamilyofRapsubtribe,RapincludeRap1andRap2,alargenumberofliteratureshowsthattheRasandRap1regulatethecytoskeleton,celladhesion,andotherfunctions,Rap260%homologyinaminoacidsequencewithRap1,46%homologywiththeRas,andRap2specificef
7、fectorsMAP4K4、MINK、TINK、PARGindicateRap2maycontactwithmicrofilamentcytoskelet-on,thisarticlemainlyexploretherelationshipbetweenRap2andmicrofilamentcytoskeletonanditsregulatorymechanism,forfurtherresearchonRap2signaling.Thispaperfirstcomparethemorphologicalchangewhenstabi
8、lityandtransientexpressedRap2bycellstainingmethod,WefindwhenNC65,CRL1932,CCF-RC-2cellsexpressedRap2,the
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