致病疫霉线粒体单倍型pcr检测方法的建立及应用

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1、万方数据分类号：S垒三三!三2密级：韭窒单位代码：!QQ墨鱼学号：2Q!!兰51致病疫霉线粒体单倍型PCR检测方法的建立及应用EstablishmentandapplicationofPCRmethodformitochondrialDNAhaplotypesofPhytophthora●^mlestafns学位申请人：齐明星指导教师：杨志辉教授朱杰华教授学科专业：植物病理学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一四年五月二十八日万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下

2、进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的仔何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：新嗣风殷签字日期：2矿j旷年岁月2窜日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑皇垦壅些盘

3、堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：前吲星导师签名：怕触}签字同期：如f孵!月29日签字日期：矽l甲年岁月z6日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：f乜话：邮编：万方数据摘要本研究在对4个致病疫霉线粒体单倍型(Ia，Ib，IIa和lib)基因组序列多态性系统分析和对已有的3种线粒体单倍型检测方法系统分析的基础上，提出并建立了以PCR为基础的致病疫霉线粒体单倍型快速检测的

4、新方法。本研究通过分析致病疫霉线粒体多态性，发现了致病疫霉线粒体基因组中由大片段插入／缺失引起的2个高变区即HVRi和HVRii，并将其确定为线粒体单倍型检测方法的目标区域。第一个高变区HVRi由长度为1885bp的片段插入／缺失引起，该高变区用于直接确定1990年Carter等人限制性内切酶酶切发现的用于区分由线粒体基因组长度引起的不同线粒体类型，即typeI和typeII。而第二个高变区HV雕i不同数目(n=1，2，3)由36bp重复单元构成。该区域扩增子长度多态性应用于线粒体新类型的确定。综合致病疫

5、霉线粒体两个高变区，将其单倍型划分为6种类型即IRI，IR2，IR3，IIRI，IIR2和IIR3。本研究以23株致病疫霉菌株为例，用PCR方法检测出5种线粒体单倍型，未发现IIRl型。同时，在被测的23株代表性菌株中也发现了6个typeI型菌株的错误鉴定，它们是由于PCR．RFLP方法中P4产物第二个酶切位点识别序列中的碱基C突变为T而造成的。利用新建的PCR方法测定我国10个省、市、自治区共459株致病疫霉菌株的线粒体单倍型。其中，引起马铃薯晚疫病菌共计434株，共发现了5种线粒体单倍型，仍未发现II

6、Rl；引起番茄晚疫病的共25株并且其中仅发现1种单倍型即IR3。本研究基于PCR技术建立的病疫霉线粒体单倍型检测方法，简单、快速、准确，可广泛用于致病疫霉群体结构、动态变化和演化研究。此外，分析序列发现II型通过不同方式的大片段缺失而形成I型，我们推断II型线粒体比较古老。关键词：致病疫霉；线粒体单倍型；晚疫病；新方法；单倍型分析万方数据EstablishmentandapplicationofPCRmethodformitochondriaiDNAhaplotypesofPhytophthorainfe

7、stansMastercandidate：QiMing—xingMajor：PlantPathologySupervisor：YangZhi—huiSupervisor：ZhuJie·huaAbstractBasedonpolymorphisicanalysisoffourmitochondrialgenomes(Ia，Ib，IIaandlib)andsystemicanalysisoftheexistedthreemethodsformitochondrialhaplotypesidentifying，

8、thetheoreticalbasisofanovelPCRmethodforidentifyingmt-DNAhaplotypesWasestablished．Genomesequencingofthefourhaplotypes(Ia，Ib，IIa，andIIb)allowedUStothoroughlyexaminemt—DNApolymorphismsandweindentifiedtwohypervariablere