大蒜植株中蒜氨酸酶的分离及酶学特性研究

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1、分类号：TS209密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：2009811507大蒜植株中蒜氨酸酶的分离及酶学特性研究StudyOnPurificationAndEnzymaticPropertiesOfAlliinaseFromGarlicPlant专业名称：农产品加工及贮藏工程指导教师姓名：张民教授研究生姓名：宋秀欢申请学位级别：农学硕士论文提交日期：2012年1月论文课题来源：自选项目学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除

2、文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。、'、作者签名：客必然日期：为陟年?月珂日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，

3、以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。’^作者签名：并务众日期：1科y年≥月f甲日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密Il(请在方框内打“√”)，在年解密后适用本授权书。本

4、学位论文属于不保密l研(请在方框内打“1J”)。作者签名：害瓷奴日期：纠≯年≥月哆日导师签名：，务酝／日期：7．-012／年Dj月／罗日摘要大蒜植株中主要功能物质是由蒜氨酸酶催化蒜氨酸产生的极不稳定的大蒜素等含硫化合物。本试验以大蒜植株为原料，依次采用Na+／K+磷酸缓冲溶液浸提法、PEG8000沉淀法、超滤浓缩法、SephadexG．75色谱柱层析法分离纯化出蒜氨酸酶，并采用SDS．PAGE凝胶电泳鉴定其纯度；以蒜氨酸为底物研究蒜氨酸酶的酶学特性；并对蒜氨酸酶解产物的抗氧化性及抑菌活性进行了研究。主要结果如下：蒜氨酸酶的分离纯化工艺为：

5、pH7．0的N涮磷酸缓冲溶液浸提蒜氨酸粗酶液，加入15％PEG8000去除部分杂蛋白，再在上清中加入PEGS000使其终浓度为25％，取沉淀；用截留分子量为30K的中空纤维膜，压力为0．1MPa，缓冲溶液循环超滤两次；通过SephadexG．75色谱柱进行纯化。并经过SDS．PAGE电泳显示其纯度得到提高。蒜氨酸酶的酶学特性为：最适温度50℃，最适_pH6．5，米氏常数Km=2．38mmol·L～，Vmax=1．051maol·min-1；蒜氨酸酶在温度为30℃时相对稳定，pH在6．9条件下相对比较稳定：M92+、EDTA-Na、Fe针、

6、甘油、PLP、葡萄糖对酶促反应有激活作用，Ba2+、ca+、C02+、Cu2十、L．半胱氨酸对酶促反应有抑制作用；蒜氨酸酶的糖含量为7．65％，且糖肽键连接方式是N-型连接。不同活力单位的酶处理蒜氨酸的产物可提高蒜氨酸样品的总抗氧化能力及对DPPH、羟自由基的清除能力；酶处理的蒜氨酸样品对DPPH．、羟自由基的清除能力与处理时间成反相关，酶处理时间对其总抗氧化能力影响不大。酶处理的蒜氨酸样品对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌4种菌均有不同程度的抑制作用，对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用相对较强，对变形杆菌的次之，对金黄色葡萄球菌

7、的抑制能力相对较弱。关键词：大蒜植株；纯化；酶学特性；抗氧化；抑菌ABSTRACTTheextremelyunstableallicinandothersulfer-containingcompoundsissuggestaSfunctionalactivecompoundsingarlicplant,whichisliberatedfromthemorestablealliinbythealliinaseif骶shgarlicplantiscrunched．ThegarlicplantislaWmaterials．thealliinas

8、eingarlicplantswereextractedbyN客／K1phosphatebuffer,andpurifiedbyPolyethyleneGlycol8000precipitat