非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2及核因子—κb在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中作用探究

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1、非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2及核因子KB在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中作用探究［摘要］目的观察糖尿病牙周炎条件下小鼠牙周组织中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2（PTPN2）、核因子-kB（NF-kB）的表达与牙周组织破坏的关系。方法将4周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组（N组）、单纯牙周炎组（P组）及糖尿病牙周炎组（DP组），每组6只。采用口内接种牙龈吓咻单胞菌法在P组建立牙周炎模型，采用腹腔注射链麻佐菌素结合高脂高糖食物与口内接种牙龈吓咻单胞菌法在DP组建立糖尿病牙周炎模型。各组动物于P、DP组末次细菌接种4周后处死，通过体视显微镜观察牙槽骨形态和附着丧失面积，采用苏木精-伊红（H

2、E）染色法观察牙周附着丧失的高度，免疫组织化学法检测牙周组织中PTPN2与NF-kB的表达强度。结果P、DP组牙槽骨的附着丧失面积和牙周附着丧失高度均高于N组（P0.05）。由图1可见：N组牙槽骨形态较正常，未出现明显骨吸收（图1A）；P、DP组可见牙槽晞顶高度降低，牙槽骨表面有骨吸收陷窝，根分叉暴露（图IB.C）o2.2HE染色结果采用HE染色观察上颌牙槽骨的形态学变化见图2,其附着丧失高度的测量结果见表1。由图2可见：N组附着丧失很少(图2A)；P、DP组有牙周袋形成，上皮钉突增生成网状，牙周组织中有慢性炎细胞浸润(图2B、C)o由表1可见：N组的附着丧失高度小于P和DP组(P0.05

3、)。2.3免疫组织化学染色结果3组的免疫组织化学染色情况见图3,其A0D测量结果见表1：PTPN2蛋白在正常牙龈上皮细胞、牙周结缔组织细胞的细胞质与细胞核中均有表达，在N组的表达强度高于P组及DP组(P0.05)；NF-kB表达于牙周组织细胞的细胞质与细胞核中，在N组的表达强度明显低于P组及DP组(P0.05)o3讨论牙周炎是主要的口腔疾病之一，在糖尿病患者中具有较高的发病率，是糖尿病的第六大并发症。因其常导致严重的附着丧失与骨吸收，极大地影响患者的生活质量，所以糖尿病牙周炎的发生发展机制及防治手段在牙周疾病研究中倍受关注。患有糖尿病时，宿主对病原微生物产生的过度炎症反应是造成牙周组织破坏

4、的重要原因。作为一种真核细胞转录因子，NF-kB的激活与多种炎症性疾病密切相关。在正常生理情况下，NF-kB常与其抑制蛋白(inhibitorkB,I-kB)家族成员结合，以无活性复合物的形式存在于细胞中；当病原微生物及其产物如内毒素等细胞外信号作用于细胞时，可激活相应受体将信号传导入细胞内，使I-KB磷酸化并与NF-kB解离，导致NF-kB进入细胞核内与特异的DNA序列结合，调节靶基因转录和表达，促进炎症的发生发展［5］。有学者［6］发现：牙周炎患者牙周组织细胞的细胞核及细胞质中NF-kB的激活率远高于正常组织；在另外的研究［7-8］中发现：牙周致病菌P.gin-givalis侵入牙龈上

5、皮细胞时会激活NF-kB途径，引起白细胞介素等炎症因子的生成增加，并可趋化中性粒细胞等炎细胞到感染部位，引发炎症反应。此外，NF-kB可抑制中性粒细胞等炎细胞的正常凋亡，使其死亡从而崩解释放多种破坏牙周组织的酶，增强炎症反应［2］。已有研究［9］发现：NF-kB与糖尿病状态下的炎症损伤调节有重要的关系，降低NF-kB的水平可有效改善糖尿病患者神经系统的炎性病变。本实验结果显示：与正常对照组相比，糖尿病牙周炎小鼠的牙周组织有明显的附着丧失，出现牙周袋及炎细胞浸润，且NF-kB表达增强。其可能机制为细菌感染牙周组织时，牙龈成纤维细胞、巨噬细胞等细胞的NF-kB途径被激活，引起白细胞介素、肿瘤坏

6、死因子-a(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)等炎症因子释放，趋化并活化炎症细胞，释放更多的炎性介质，致使炎症反应加剧并加重组织损伤，如诱导结缔组织间质细胞产生基质金属蛋白酶使间质中的胶原降解，刺激基质细胞凋亡限制牙周组织修复，促进破骨细胞分化及骨吸收等［10-11］O有学者［12］发现，在糖尿病条件下，巨噬细胞、中性粒细胞等细胞对细菌释放的内毒素的反应更为敏感，能释放更多的炎症因子，并使炎症反应延长，这能促进糖尿病并发的炎症反应出现严重的破坏且进展迅速。本实验中，DP组小鼠的牙周附着丧失量、NF-kB表达量的测量值与P组的差异无统计学意义，可以考虑在下一步实验中采用

7、MicroCT、实时荧光聚合酶链反应、免疫印迹法等灵敏度更高的方法进一步检测组间的差异。PTPN2是蛋白酪氨酸磷酸酶家族的重要成员，有两种mRNA编辑方式：一种编码形成相对分子质量为4.8X104的蛋白质，称为TC48,定位于内质网和高尔基复合体；另一种编码形成相对分子质量为4.5X104的蛋白质，称为TC45,定位在细胞核内［3］。TC45发挥主要的生物学作用，当细胞受到刺激后，TC45游离出细胞核，使细胞质内的蛋白质