5-aza-cdr对mg63骨肉瘤细胞rassf1a基因表达及细胞繁殖的影响

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1、硕士学位论文5-Aza．CdR对MG63骨肉瘤细胞RASSFlA基因表达及细胞增殖的影响作者姓名：熊军学科专业：学院(系、所)：指导教师：外科学湘雅三医院臧晓方副教授中南大学二0一二年五月分类号VDC硕士学位论文密级5-Aza-CdR对MG63骨肉瘤细胞RASSFIA基因表达一及细胞增殖的影响Effectsof5-Aza--CdRontheproliferationandRASSFlAgeneexpressionofosteosarcomacellsMG63作者姓名：学科专业：熊军外科学学院(系、所)：湘雅三医院指导教师：臧晓方副教授答辩委员会主席中南大学二0一二年五月哪4删0删7帅唧，，㈣9

2、舢—●舢2舢Y原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：丝圣日期：丝竺年舅互日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权

3、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：墨导师签名硕士学位论文中文摘要摘要目的：本研究选择RASSFIA作为研究目标，探讨不同浓度的甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR(5-Aza一2’一deoxycytidine，5一氮杂一2’脱氧胞苷)干预骨肉瘤细胞系MG63后对其RASSFlA抑癌基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖的影响。研究方法：(1)细胞增殖情况的检测：培养骨肉瘤MG63细胞，2—3天传代一次。取生长良好的细胞，分别用不同浓度剂量(O、5、10、50“m01／L)的5-Aza-CdR处理，处理不同时间(24h、48

4、h、72h、96h)后，MTT法检测各组细胞的增殖情况。(2)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSFlA基因mRNA表达变化情况：培养骨肉瘤MG63细胞，并提取细胞总RNA，采用RT-PCR法扩增经不同浓度剂量(0、5、10、50limol／L)5-Aza—CdR处理MG63细胞系72h后的细胞RASSFIA基因mRNA转录水平。(3)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSFla蛋白的表达变化情况：细胞MG63分别用不同浓度剂量(0、5、10、50ⅢnollL)的5-Aza—CdR处理72h后，经0．2％胰酶处理，离心收集细胞，经western—blot检测M

5、G63细胞系RASSFIa蛋白的表达水平。结果：(1)细胞增殖的变化：骨肉瘤细胞MG63经0—50limol／L5-Aza—CdR诱导96h后，MG63细胞增殖减少，细胞生长速度明显下降，差异有统计学意义(P<0．05)。(2)RASSFIA基因表达的变化：经0—50umol／L5-Aza—CdR诱导72h后骨肉瘤细胞MG63的RASSFlA基因表达经RT—PCR及WB检测显著上调，与实验对照组比较，差异有统计学意义(P

6、调。结论：骨肉瘤MG63细胞系经5-Aza-CdR的干预后，随着干预浓度的增加抑癌基因RASSFlA的mRNA及蛋白表达上升，同时MG63细胞的增殖速硕士学位论文中文摘要度下降。关键词：MG63，5-Aza-CdR，RASSFIA，细胞增殖Ⅱ硕士学位论文英文摘要ABSTRACTobjective：ExplorethedifferenceinRASSFIAtumor-suppressorge-nesmRNAandproteinexpressionandtheinfluenceofcellprolife．rationandapoptosisafterdifferentconcentrationof

7、methylationshiftenzymeinhibitors5-Aza-CdR(5一Aza-2-deoxycytidine，5-nitrogenmiscellaneous一2deoxidizingcellnucleoside)interventtingosteosarco-maMG63．Methods：(1)Cellproliferationconditiondetection：Trailli