htral基因在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌侵袭迁移的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文HtrAl基因在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌侵袭迁移的影响姓名：付丽丽申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：尹一兵；杨正林201205HtrAl基因在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌侵袭迁移的影响摘要目的：检测HtrAl基因在卵巢癌细胞系(HO一8910，HO．8910PM)及不同病理分期卵巢癌组织中的表达差异水平；通过研究HtrAl基因对肿瘤迁移侵袭的影响，进一步探讨HtrAl基因在卵巢癌侵袭迁移过程中可能的调节机制。方法：1．免疫组化检测卵巢癌组织芯片HtrAl表达，包括30例不同病理分期的卵巢癌组织，10例匹配的转移癌组织，8例正常组织。2．应用免疫细

2、胞化学法检测HO．8910和HO．8910PM两株细胞HtrAl的定位和表达，Westemblot检测两株细胞HtrAl蛋白水平上的表达差异。3．构建pcDNA3．1一HtrAl真核表达载体，并通过双酶切及测序鉴定。4．以HO一89lO和HO．8910PM两株细胞为研究对象，以转染pcDNA3．1一HtrAl和HtrAl—siRNA为处理组，空载的pcDNA3．1和ScrambledsiRNA为对照组，IHFQ—PCR，Westemblot分别检测转染后各组HtrAl表达水平。5．CCK8检测瞬时转染后不同处理组细胞增殖水平变化。6．DAPI染色观察转染后各组细胞凋亡差异程度。7．Trans

3、well小室法以及细胞划痕实验观察细胞转染后迁移侵袭能力的改变。结果：1．免疫组化分析显示在肿瘤组织与正常组织中HtrAl表达差异具有统计学意义(P<0．05)，转移癌与原发肿瘤组织相比存在显著1性差异(P<0．05)，但是不同病理分期的卵巢癌组织之间无明显差异(P>0．05)。2．免疫细胞化学方法分析HtrAl在HO一89lO和H0-8910PM细胞株都有表达，主要定位在胞浆，Westernblot分析H0—8910细胞的HtrAl蛋白表达水平显著高于HO一8910PM。3．成功构建pcDNA3．1一HtrAl真核表达载体，双酶切及测序鉴定正确无突变。4．RTFQ．PCR，WestemBl

4、ot检测转染后处理组细胞与对照组细胞HtrAl表达水平存在显著差异，外源表达及干扰作用效果明显。5．转染后细胞增值和凋亡水平未见明显差异(P>0．05)。6．划痕实验中外源表达HtrAl的HO．89lO和HO．89lOPM细胞愈合率分别为31．4％，40．6％显著低于对照组的40．8％和48％，而干扰表达后的细胞愈合率分别为49．8％，60．4％显著高于对照组的42．2％和51．0％。7．Transwell小室法迁移试验中，外源表达HtrAl的HO．8910和HO．8910PM细胞穿膜数量平均为41．2±3．7，53．6±4．2，显著低于对照组的53．2±4．O，62．2±5．7(P

5、5)。而外源干扰表达后的平均穿膜细胞数分别为61．2±5．4，80．4±6．3，显著高于对照组51．O±3．2，64．8±7．O(P

6、O一89lO细胞中的表达显著重庆医科大学硕士研究生学位论文高于HO一8910PM，并且转移肿瘤组织HtrAl表达显著低于原发部位，提示HtrAl与肿瘤转移存在相关性。3．外源表达HtrAl可有效抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭，应用siRNA导致HtrAlf氐表达后可以增强细胞的迁移侵袭的能力。关键词：HtrAl；卵巢癌；转移；侵袭THEEXPRESSIONOFHTRA1GENEINoVARIANCANCERCELLSANDEFFECToNINVASIoNANDMETASTASISABSTRACTObjective：Todetectthedi虢rentexpressionofoVariancanc

7、ercelllinesofHO一89l0，H0—8910PMandovariancancertissues．TosmdyhowHtrA1expressiononovariancancercell1inestoe虢ctthosecell’metastasisandinvasion，soastoeXploretheregulationmechanismduringovariancancerceHs’metasta